灰树花多糖协同化疗药物抗肿瘤作用及其分子机理初探论文.docVIP

　　灰树花多糖协同化疗药物抗肿瘤作用及其分子机理初探论文 .freelited by drug reistance.Recent studies suggest that a polysaccharide extracted from Grifola frondosa is able to kill cancer cells in vivo and in vitro.Hoolecular basis for the polysaccharide from Grifola frondosa synergistic effects onitoued by CCK-8 kit.p53 and MDM2 gene expression iquantitative PCR analysis of cellular RNA.Results Here Grifola frondosa had more great anti-cancer effect than shell-broken spores of G. lucidum in HCT116 cell.Moreover the polysaccharide from Grifola frodosa ay be involved in augented the polysaccharide from Grifola frondosa induced HCT116 cells sensitivity to ADM-treatment. 【Key otherapeutic drug；p53；MDM2 灰树花(Grifola frondosa)是一种生长在亚热带至温带的大型药、食兼用珍稀食用菌，又名栗蘑、贝叶多孔菌等.freelbh)DMEM(PAA Laboratories Gmbh)培养液在37℃、5%CO2条件下培养人肠癌细胞系HCT116。 1.2 细胞毒性分析 取对数生长期HCT116细胞，常规消化成2×１０４/ml的单细胞悬液，接种于96孔细胞培养板，每孔100μl DMEM细胞培养液。5%CO2、37℃ 环境中培养24h后对HCT116细胞分别用零处理；一天灰树花β多糖(3μg/ml)；一天2μg/ml化疗药物(阿霉素2μg/ml)；二天2μg/ml化疗药物(阿霉素2μg/ml)；第一天2μg/ml化疗药物(阿霉素2μg/ml)、第二天灰树花β多糖(3μg/ml)的五种不同的方法处理，次日每孔细胞中加入5μl的CCK-8试剂，5%CO2、37℃环境中培养2h后，在酶标仪上波长450nm处读取光密度A值，计算细胞存活率(cell survival rate，CSR)。 公式 1.3 统计学处理 所有数据均以均数表示，采用t检验。 1.4 RNA抽提和RT-PCT RNeasy kit (Qiagen)提取药物处理过的HCT116细胞总RNA并合成相应的cDNA，分别对p53和Mdm2作RT-PCR，PCR产物通过琼脂糖电泳观察结果。引物序列：p53正5′-GGCCATCTACAAGCAGTCAC-3′，p53反5′-GAGAGGAGCTGGTGTTGTTG-3′；Mdm2正5′-GGTGAGGAGCAGGCAATTG-3′，Mdm2反5′-GCGTCCCTGTAGATTCACTGC-3′。 2 实验结果 2.1 灰树花β多糖直接抑制肿瘤细胞的作用 众所周知，灵芝破壁孢子粉是目前被广泛用于肿瘤患者辅助治疗各种肿瘤的一种保健药物。为了探究灰树花［１］对肿瘤细胞直接的杀伤作用［６～７］，我们用各种浓度的灵芝破壁孢子粉和灰树花β多糖对人的肠肿瘤细胞HCT116株进行处理，48h后测得肿瘤细胞HCT116的生存率，结果如图1所示，我们可以观察到与灵芝破壁孢子粉相比，灰树花β多糖对肿瘤细胞的杀伤作用更强大［８］，而且这种作用是随着剂量的递增而增强的。 图1 灰树花β多糖和灵芝破壁孢子粉对肿瘤细胞的直接抑制作用 用各种不同剂量的灰树花β多糖和灵芝破壁孢子粉 作用于处理HCT116细胞48h后，细胞生存率结果用 Cell Counting Kit-8检测获得 另外，在这个实验中我们所用的起始浓度非常低(从0.05μg/ml)，由此可以判断灰树花β多糖从很低的浓度开始就有明显的杀伤肿瘤细胞的作用。 2.2 灰树花β多糖对化疗药物的协同抗肿瘤作用 为了检测灰树花β多糖、化疗药物(阿霉素)以及二者一起使用的协同作用，我们对HCT116细胞分别用零处理；一天灰树花β多糖；一天化疗药物(阿霉素)；二天化疗药物(阿霉素)；第一天化疗药物(阿霉素)；第二天灰树花β多糖的五种不同的方法处理。次日再用CCK-8药盒测得HCT116细胞的生(残)存率，如图2所示：我们发