实验一染料吸光度—浓度标准工作曲线的绘制（选做）.PDF

实验一 染料吸光度—浓度标准工作曲线的绘制 （选做） 一、实验目的 掌握分光光度计的使用方法，学会染料吸收光谱曲线的测定和未知染液浓度 的测定，加深对染色泽和吸收光谱关系的认识。 二、实验原理 测定染料在溶液中或 纤维上的含量的方法有多种，本实验介绍用分光光度 计法测定染料在溶液中的浓度。 采用分光光度法测定染料浓度的基本理论是基于朗 白比耳定理。该定 理指出，有色溶液对一束平行单色光的吸光度与溶液的浓度和液层厚 度之积成 正比。其数学表达式为： A＝KbC 其中： K－吸光系数或消光系数，表示纯物质浓度为１g/l 液层厚度为１cm 时 的吸 光度， K 是各种染料在一定波长下的特征常数 b－有色溶液的液层厚度 C－有色溶液的浓度 A－吸光度 在一定波长和一定液层厚度条件下，吸光度与稀溶 液的浓度成正比，吸光 度Ａ也可用光密度D 或消光E 表示。 根据吸光度A 与浓度C 之间的直线关系，将待测溶液 的吸光度A 与已知浓 2 度为C R 该物质吸光度A 比较，即可求出待 溶液的浓度C ，这就是比色定量分 １ 1 2 析的理论基础 C /A = C /A 或 C = C /A × A １ １ 2 2 2 １ １ 2 三、主要实验材料、化学品和仪器 1、化学品：活性红X-3B 10g/l 、Na CO 、 Na SO 2 3 2 4 2、仪器：722 型分光光度计 四、实验步骤 1、吸收光谱曲线的测定 （用活性红X-3B） 1、1 标准溶液的配制 用 10ml 的移液管移取浓度为 1g/l 的染料溶液 10ml,置于 100ml 容量瓶中 并稀释至刻度。将上述染料溶液分别按 1ml,3ml,5ml,10ml,15ml,转移到另外 1# # －5 25ml 容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，待测其吸光度。 1、2 吸收光谱曲线的测定 # 取3 染液在波长范围为380nm~730nm 内测定吸光度并从光谱吸收曲线中找 出 λ 。 max 2、混合染料浓度的测定 2、1 绘制标准曲线： # 当染料的最大吸收波长λ 确定后在最大吸收的波长下分别测定１ － max # 5 的已知浓度染液的吸光度，然后以染液浓度为横座标，以吸光度为纵座标， 制作标准曲线。 2、2 测定未知浓渡的染液： 在测定同一染料的未知浓度时以其 λ 处测得的吸光度，在标准曲线上 max 查得对应的染液浓度。 五、注意事项 1、实验时使用水作溶剂，空白溶液也用自来水 2、实验时一律使用B=1CM 的比色 ，此时A=KC 六、试验结果与讨论 根据所做图线分析染料浓度与吸光度之间呈什么关系。若染料相对应浓度 发生变化，是否影响它们两者之间的关系。