2多肽蛋白质药物.pptVIP

转基因白细胞介素制备 重组酵母基因表达 转化小鼠细胞筛选单克隆抗体表达 重组大肠杆菌表达 细胞分离细胞破碎 包含体 溶解-分离-脱盐-浓缩 白细胞介素大肠杆菌表达的纯化方法 基因重组大肠杆菌于LB培养基(含氨苄青霉素)37oC震荡培养过夜 次日按1:100比例稀释继续扩增至OD600=0.4左右 加诱导剂IPTG,(异丙基－b-d-硫代半乳糖苷)至终浓度2mmol/L,在30oC下诱导6小时,收集表达IL-18菌体. 收集菌体加细胞裂解液,用超声波破碎菌体. 25000g离心30分钟沉淀于6-8mol/L的盐酸胍或脲溶解包含体,透析或直接稀释40-50倍以创造蛋白质再折叠的条件.然后用一般蛋白质的分离方法即可. * * 一、多肽药物及其生产工艺 多肽类药物 多肽激素：垂体多肽激素、促皮质激素、促黑素、脂肪水解素、催产素、加压素 甲状腺激素：甲状旁腺激素、降钙素 胰岛激素：胰高血糖素、胰解痉多 胃肠道激素：胃泌素、肠血管活性素、抑胃肽 胸腺激素：胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子 含有多肽成分的其他生化药物 骨宁、眼生素、血活素、氨肽素、蜂毒、蛇毒、胚胎素、花粉提取物、心脏激素等 １、多肽类药物——胸腺素的制备 用途：原发性和继发性免疫缺陷病，如反复上呼吸道感染;自身免疫性疾病，如肾病、红斑狼疮、类风湿关节炎、重症肌无力;变态反应性疾病，如支气管哮喘；细胞免疫功能减退的中老年人和老年人疾病，并可抗衰老；肿瘤的辅助治疗。 黄海葵强心肽A（AP—A）的制备 海洋生物中有许多含有多肽或蛋白质毒素往往具有特殊的药物功能。如海葵毒素等的强心功能，棘皮、软体等动物的抗癌肽的抗癌功能等。 黄海葵强心肽就是其中一种。人们已从黄海葵中分离出具有强心作用的黄海葵强心肽A、B、C。 AP—A由49个氨基酸组成，Mr为5500，属碱性多肽。 ２、黄海葵毒素的制备 二、蛋白药物及其生产工艺 蛋白质药物 蛋白质激素：垂体蛋白质激素（生长素、催乳激素、促甲状腺激素、促卵泡激素）、促性腺激素（人绒毛膜促性腺激素、血清性促性腺激素）、胰岛素及其他蛋白质激素（胰岛素、胰抗脂肝素、松弛素） 血浆蛋白质：白蛋白、纤维蛋白溶酶原、血浆纤维结合蛋白、多种免疫球蛋白、纤维蛋白原、抗凝血酶III、凝血因子VIII和IV。 蛋白质类细胞生长调节因子：干扰素(IFN)、白细胞介素(IL)、神经生长因子、肝细胞生长因子、血小板生长的生长因子、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、组织纤溶酶原激活因子（tPA）、促红细胞生成素(EPO)等 胶原蛋白：明胶、阿胶 蛋白酶抑制剂： 蛋白质药物－白介素2的动物细胞制备 作用：白细胞介素－2（IL－2）能诱导T细胞分泌?－干扰素，增强杀伤细胞的活性，在调整免疫功能上具有重要作用。临床用于治疗一些免疫性疾病，如艾滋病、原发性免疫缺损、老年性免疫功能不全以及癌症的综合治疗。对创伤修复也有一定的作用。 工艺路线 工艺过程 ①诱生用鸡瘟病毒刺激人外周血白细胞，37℃培养。 ②病毒灭活和固液分离 用 6mol/L HCI调节 pH2.0~2.5，再用 6mol／L NaOH调节pH7.2～7.4，离心除去变性杂蛋白。 ③硫酸按分级沉淀取上述离心后的培养上清液，加饱和硫酸按至35％饱和度，24h离心弃去沉淀。上清液补加固体硫酸按至 85％饱和度， 4℃静置 24h离心，收集沉淀。 ④除盐将沉淀溶于pH6.5、10mmol／L PBS中（内含 2％正丁醇和 0.15NaCI）。透析 24h（更换 5次透析外液）。 ⑤蓝色琼脂糖层析将上述透析内液通过 Sepharose 4B层析柱，用 200mlPBS去不吸附的蛋白，再用含 0.4mol/L NaCI的 PBS洗涤亲和柱，最后用含 1.0mol／LPBS解吸IL－2活性组分。 ⑥凝胶层析将解吸的 IL－2活性组分经 PEG（MW6000）浓缩，再上 ACA44UItrogel层析柱。柱用含 0.1％PEG、 2％正丁醇和 pH7.6的 0.2mol／L甘氨酸的Tris.HCI洗脱，得 IL－2。 *