肾上腺糖皮质激素对其受体、热休克蛋白90和组蛋白去乙酰化酶6的影响及中药干预研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 肾上腺糖皮质激素对其受体、热休克蛋白90和组蛋白 去乙酰化酶6的影响及中药干预研究 ．屿!釜 刖 吾 糖皮质激素是由肾上腺皮质分泌的脂溶性类固醇激素，具有抗炎，抗过敏， 免疫抑制作用，但长期应用后可引起下丘脑一垂体一肾上腺皮质轴抑制，使肾上 腺皮质功能受到影响，造成激素撤减困难。糖皮质激素通过与糖皮质激素受体结 合而发挥作用，需要热休克蛋白90作为分子伴侣，热休克蛋白90伴侣活性通常 由可逆的乙酰化调整，由位于胞浆的组蛋白去乙酰化酶6控制。本实验主要探讨 耱皮质激素受体、热休克蛋白90a、热休克蛋白9013、组蛋白去乙酰化酶6在长期 应用糖皮质激素和灌服右归丸后有无变化及其变化的意义。 材料 实验动物：清洁级SD大鼠 实验仪器和试剂：实时定量PCR扩增仪逆转录试剂盒，PCR试剂盒淋巴 细胞分离液TRIZOLDEPC地塞米松右归丸水煎液 实验方法 采用清洁级SD大鼠45只，雄性，4月龄，体重2009左右。随机分成3组， 每组15只。 (1)空白对照组：每日肌注生理盐水lml／kg，连续15天，第16天开始肌注 的同时灌胃生理盐水4ml，再持续15天； (2)地塞米松组：每日肌注5mg／ml地塞米松磷酸钠注射液(1mg／kg，)连 续15天，第16天始地塞米松肌注量减半(O．5mg／kg)，再持续15天。 (3)地塞米松加中药组：每日肌注地塞米松(1mg／kg)连续15天，第16天 始地塞米松肌注量减半，同时灌服右归丸水煎液，用量为20ml／kg，每日1次，再 持续15天。 抽血，分离单个核细胞，提取总RNA，反转录和rcaltime-pcr。 统计学处理：结果采用单因素方差分析(one-wayANOVA)p0．05为差异有 统计学意义。 ． 结果 l、地塞米松组GRmRNA的表达水平与正常对照组相比明显降低，地塞米松 加中药组GRmRNA的表达水平与正常对照组相比明显降低，差异有显著性。 2、地塞米松组HsP901BmRNA表达水平与正常对照组相比明显降低，地塞米 松加中药组HSP90DmRNA表达水平比地塞米松组升高，而比正常组低，未达到 正常水平。 3、地塞米松加中药组HDAC6mRNA表达水平明显高于正常组和地塞米松组， 差异有显著性。 讨论 糖皮质激素通过与糖皮质激素受体结合而发挥作用，需要热休克蛋白90作为 分子伴侣，热休克蛋白90伴侣活性通常由可逆的乙酰化调整，由位于胞浆的组蛋 白去乙酰化酶6控制。 HSP9013与抗凋亡、药物抵抗等有关。本实验显示在应用糖皮质激素后HSP9郇 表达降低，推；澳gHSP9013介导抗凋亡能力下降，单个核细胞凋亡增加。在应用右归 丸后HSP9013表达略有回升，推测HSP9013介导抗凋亡能力上升。 缺乏的细胞，Hsp90依赖的糖皮质激素受体成熟受影响。本试验结果显示注射糖 皮质激素后再服用右归丸大鼠外周血单个核细胞的HDAC6mRNA表达比单独注 射糖皮质激素升高。所以推测右归丸对可能与对HDAC6的调控有关，进而增加 了糖皮质激素受体的稳定性。 结论 l、长期应用糖皮质激素后热休克蛋白9013表达减少，右归丸对其变化有改善 作用。 2 2、右归丸使长期应用糖皮质激素后的组蛋白去乙酰化酶6的表达增加。 关键词 糖皮质激素受体；热休克蛋白90；组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6) 3 ·英文论著摘要· The ofGR ChangeandHSP90andHistone 6afterthe Deacetyl