菲律宾蛤仔RP2基因的克隆及组织表达分析.PDFVIP

第30卷第2期 大 连 海 洋 大 学 学 报 Vol.30 No.2 20 15 年4 月 JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSITY Apr . 2015 DOI:10.3969/ J.ISSN.2095-1388.2015.02.004 文章编号:2095-1388(2015)02-0132-06 菲律宾蛤仔RP2 基因的克隆及组织表达分析 裴爱君, 杨艳津, 秦艳杰, 赵祥吉, 闫喜武, 李霞, 王福景 (大连海洋大学 辽宁省贝类良种繁育工程技术研究中心, 辽宁 大连 116023) 摘要:采用反转录PCR (RT-PCR) 与cDNA末端快速克隆 (RACE) 法首次从壳长为28 mm 的菲律宾蛤 仔Ruditapesphilippinarum外套膜中克隆出RP2 基因 (GenBank登录号: KF826881)。 结果表明: RP2 基因 cDNA序列长度为1158 bp, 包括62 bp 的5忆端非编码区,41bp 的3忆端非编码区, 开放阅读框1053 bp, 编 码350个氨基酸; 推导的氨基酸序列具有TBCC(57aa~175aa)和CARP(65aa~102aa)保守结构域, 并为非 跨膜糖蛋白; 经Blast 同源性比较表明, 菲律宾蛤仔RP2 氨基酸序列与太平洋牡蛎 Crassostrea gigas 的相似 性较高 (56%), 与高等哺乳动物、 鸟类、 鱼类、 两栖类和节肢动物各模式动物之间的相似性为43% ~ 53%, 与非洲眼线虫Loaloa 的相似性较低 (33%); 利用实时定量PCR技术检测RP2基因在菲律宾蛤仔不 同组织中的表达, 结果显示, RP2基因在菲律宾蛤仔雄性性腺中表达量最高, 在鳃、 水管和外套膜组织中 次之, 在斧足和闭壳肌中表达量极少, 在雌性性腺中无表达。 研究表明, RP2基因在菲律宾蛤仔各组织中 的表达较为广泛, 但不同组织的表达量存在明显差异, 本研究结果可为无脊椎动物RP2基因的结构及其功 能研究提供基础数据。 关键词:菲律宾蛤仔; 视网膜色素变性基因2; 分子克隆;组织表达分析 中图分类号: S917郾4摇 摇 摇 摇 文献标志码: A [3-4] 摇 摇 视网膜色素变性 (retinitis pigmentosa,RP) 是 失 。 通过连锁分析发现, 大约20%的XLRP是 [5] 一组具有显著临床及遗传异质性的遗传性眼病。 在 由于RP2基因突变所致 。 目前, 对人RP2 基因 各遗传类型中, X染色体连锁遗传 (X-linked reti鄄 突变引发疾病的相关报道较多, 在低等动物中, 葛 [6] nitis pigmentosa,XLRP) 临床表现最为严重, 且发 广韬等 研究了人RP2基因在果蝇Musca domestica 病年龄早, 人一般在10 岁前即发病, 40 岁前即可 胚胎细胞中的表达, 此项研究证明了人RP2 基因 [1] 完全失明 。 目前, XLRP 已经定位 7 个基因位 在果蝇细胞中表达的可能性。 斑马鱼 Danio rerio [7] 点,5个位于 X 染色体的短臂 Xp (RP2、 RP3、 RP2基因也已经被成功地克隆 , 并且研究表明,