幽门螺杆菌napA基因在乳酸菌中的表达及免疫原性分析.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（６）：７７～８３ 檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 殏檪檪 研究简报殏檪 檪檪檪檪檪檪檪檪 幽门螺杆菌ｎａｐＡ基因在乳酸菌中的 表达及免疫原性分析  李建芳　彭正华　肖红剑　罗　娜　杨增福　李健锋 　徐维明 （中国医学科学院／北京协和医学院医学生物学研究所　昆明　６５０１１８） 摘要　为在乳酸菌中表达幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）中性粒细胞激活蛋白（ＮＡＰ）， 口服免疫小鼠后检测其免疫原性。在实验中利用了分子克隆技术构建携带ｎａｐ基因的重组原核 表达质粒ｐＮＩＣＥ：ｓｅｃｎａｐ，将重组质粒转化乳酸菌ＮＺ９０００株，筛选鉴定阳性菌落，诱导表达的 ? ＮＡＰ蛋白用ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ进行鉴定。将雌性ＩＣＲ（ＣＶ级）小鼠随机分为４组，分别用 ? ＰＢＳ、携带空质粒的乳酸菌、携带ｐＮＩＣＥ：ｓｅｃｎａｐ的乳酸菌、灭活的Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ灌胃。免疫７次后检 ? 测其特异性 ＩｇＧ和 ＩｇＡ的产生。成功扩增了ｎａｐ基因并构建了重组原核表达质粒ｐＮＩＣＥ：ｓｅｃ? ｎａｐ，转化乳酸菌ＮＺ９０００后经ｎｉｓｉｎ诱导可表达Ｍｒ约１７ｋＤａ的重组蛋白，表达量约占菌体总蛋白 量的９．５％，表达的蛋白能与兔抗Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ血清特异性反应，具有良好的免疫原性。携带ｐＮＩＣＥ： ｓｅｃｎａｐ质粒的乳酸菌刺激产生的ＩｇＧ水平明显高于携带空质粒组，与灭活Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ组没有明显 ? 的差异，但其刺激产生的ＩｇＡ水平明显高于其他组。以上结果说明表达ＮＡＰ蛋白的乳酸菌口服 免疫小鼠后，能够刺激小鼠产生特异的ＩｇＧ和ＩｇＡ，对幽门螺杆菌疫苗的研究开发具有理论意义。 为乳酸菌作为抗原递送载体的研究和Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ口服疫苗的开发提供了一定的实验基础。 关键词　幽门螺杆菌　乳酸乳球菌　ｎａｐＡ基因　中性粒细胞激活蛋白 中图分类号　Ｑ３５２ 　　幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）是 １９８２ 的关键是获得对人体安全有效的免疫原。幽门螺杆菌 年由ＲｏｂｉｎＷａｒｒｅｎ与ＢａｒｒｙＭａｒｓｈａｌｌ首次分离得到的一 中性粒细胞激活蛋白（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉｎｅｕｔｒｏｐｐｈｉｌａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ? 种螺旋状，微需氧的革兰氏阴性菌，主要定植于胃黏液 ｐｒｏｔｅｉｎ，ＮＡＰ）相对分子量约为１７ｋＤａ，编码 １４４个氨基 ［１］ ［５］ 层下面，黏膜上皮表面 。研究证据表明，Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感 酸，几乎所有的幽门螺杆菌菌株均有表达 。该蛋白 染是慢性胃炎，消化性溃疡，胃癌和胃粘膜组织淋巴瘤 位于细菌细胞质中，可通过细菌自溶而释放，并附着在 ［６］ （ＭＡＬＴ）等疾病的重要致病因素，被ＷＨＯ确定为一类 细菌外膜表面，介导了Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ与细胞表面的结合 ， ［２］ ［５］ 致癌因子 。目前根除Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染主要用以抗生素 并能够趋化和激活嗜中性粒细胞，导致炎症 。ＨＰ? ［３］ ＮＡＰ在酸性条件下，能够结合甚至浓缩 ＤＮＡ，以保护 为基础