紫外分光光度法测定酸奶中的纳他霉素.docVIP

紫外分光光度法测定酸奶中的纳他霉素 实验目的 进一步熟悉紫外分光光度计 学习在紫外光谱区测定酸奶中的纳他霉素含量 实验原理 如图，纳他霉素在紫外光谱范围内在280nm处有肩，340 nm以上无明显的吸收，由于纳他霉素含有四烯环，因此在290、303、318 nm处有尖锐的吸收峰，其最大吸收波长为303 nm，且该波长附近吸收值稳定范围较宽，检测器波长即使有小的漂移也不会引起大的检测误差，因此，选择303 nm作为纳他霉素的检测波长既有足够的灵敏度，又有可靠的稳定性能，是理想的检测波长。而酸奶在303nm处干扰物质较少，因而可用紫外分光光度法对酸奶中纳他霉素进行测定。 使用仪器、材料 仪器：紫外分光光度计、石英比色皿、分析天平、快速混匀器、25ml和50ml容量瓶、50ml三角瓶、离心机、500μl和1000μl移液枪 试剂：酸奶，甲醇，冰醋酸，95%纳他霉素标准品，蒸馏水 实验步骤 配制纳他霉素标准液 取10mg的95%纳他霉素标准品，用甲醇：冰醋酸：蒸馏水=64：8：28溶液溶解，最后定容于100ml，备用； 分别取上述纳他霉素贮备液500、750、1000、1250、1500、1750、2000μl于7只50ml容量瓶中，用甲醇：冰醋酸：蒸馏水=64：8：28溶液稀释至刻度，摇匀； 绘制标准曲线 以甲醇：冰醋酸：蒸馏水=64：8：28溶液为参比，在波长303nm处测定步骤1配制的7个标准溶液的吸光度。 样品测定 样品溶液的制备：称酸奶样品2.5克（精确到0.001克），加甲醇16ml，加冰醋酸2ml，振荡摇匀3-5分钟，加水定容于25ml，离心后待用； 以未加纳他霉素的酸奶为空白对照，处理方法同样品溶液的制备。在波长303nm处测定样品的吸光度。 4、回收率和精确度实验 取处理好的酸奶样品2份，1份作为本底值，另1份加入已知质量浓度标准液，分别按上面方法测定纳他霉素含量，再根据测定值计算出纳他霉素的回收率； 相对标准偏差（RSD）或变异系数（CV）：用不同仪器测定同一样品，计算实验方法的重现性。 实验数据： 1.绘制标准曲线 紫外分光光度计1 纳他霉素溶液(μg/ml) 0.95 1.425 1.9 2.375 2.85 3.325 3.8 OD303 0.096 0.146 0.199 0.242 0.292 0.342 0.394 根据表格数据绘制标准曲线： 紫外分光光度计2 纳他霉素溶液(μg/ml) 0.95 1.425 1.9 2.375 2.85 3.325 3.8 OD303 0.069 0.115 0.1530 0.196 0.232 0.273 0.312 根据表格数据绘制标准曲线： 紫外分光光度计3 纳他霉素溶液(μg/ml) 0.95 1.425 1.9 2.375 2.85 3.325 3.8 OD303 0.075 0.119 0.156 0.200 0.235 0.278 0.320 根据表格数据绘制标准曲线： 紫外分光光度计4 纳他霉素溶液(μg/ml) 0.95 1.425 1.9 2.375 2.85 3.325 3.8 OD303 0.086 0.135 0.186 0.233 0.286 0.332 0.382 根据表格数据绘制标准曲线： 2.样品测定 加有纳他霉素的酸奶样品在四台分光光度计下测得的OD值 仪器1 仪器2 仪器3 仪器4 平均值 对照 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 样品OD303 0.145 0.128 0.125 0.135 0.13325 3.回收率和精确度实验 以已测定样品作为本底值，加入已知质量浓度标准液测得OD303值分别为0.191、0.179、0.176、0.182。 仪器1：加入标品后测定含量=（0.1910.145+ 0.0018）/0.1037×25=81.44μg 样品测定含量=（0.145+0.0018）/0.1037×25=35.39μg 回收率（加入标品后测定含量－样品测定含量）/加入标品量*100% （81.44-35.39）/（0.5*95）×100%96.95% 仪器2：加入标品后测定含量=（0.179+0.128 0.0079）/0.0845×25=93.17μg 样品测定含量=（0.128+0.0079）/0.0845×25=40.21μg 回收率（加入标品后测定含量－样品测定含量）/加入标品量*100% （93.17-40.21）/（0.5*95）×100%111.50% 仪器3：加入标品后测定含量=（0.176+0.125 0.0046）/0.0851×25=89.78μg 样品测定含量=（0.125 0.0046）/0.0851×25=38.07μg 回收