径向顶替柱色谱.pptVIP

四种形式 间隔置换色谱(spacer displacement chromatography) 在流动相中加入对固定相有不同吸附力的物质，即隔离剂(spacer)，使得形成的样品组分的置换序列由于隔离剂的插入而被分开，尤其适于复合蛋白混合物的分离。 配位置换色谱(complex displacement chromatography) 不同之处在于置换剂不直接参与对固定相吸附部位的竞争，而是与目标产物结合，当结合的置换剂的量达到一定程度，便可降低目标产物对固定相的亲和力，使其以配合物的形式被分离，从色谱柱中流出。但产物需经后处理，以分离结合的置换剂。 四种形式 试样置换色谱(sample displacement chromatography) 自置换方式，不需要外加置换剂，样品组分中结合力较强的组分充当置换剂去置换其它结合力较弱的组分，因此又称溶质置换色谱(solute displacement chromatography)。由于无外加置换剂，因此不必从产物中去除，大大减少了后处理的工作量。 选择性置换色谱(selective displacement chromatography) 可选择置换目标样品，使其与其它杂质分离，其中保留较弱的杂质在样品置换序列之前被洗脱，保留较强的杂质则在置换剂前沿突破峰之后解吸。 置换色谱 优点（同传统的洗脱色谱方式相比）: 1．允许上样量比洗脱色谱高得多，尽管如此，在置换分离过程中，被分离组分仍能以相当高的纯度获得高产率。 2．各组分在分离过程中能形成较清晰的界限，消除了洗脱分析中的拖尾现象，提高了样品组分的回收率。 3．产物浓度的可控性 4．需要溶剂较少 5．可同时分离纯化几种物质 * 径向柱的外表面很大，因此能承载的样品量较多；如果增加色谱柱的长度，可以呈线性地增大色谱柱的制备量，而各组分的分辨率及保留时间没有多大的变化；径向柱色谱法由于流量很大，色谱柱的半径较小，因此样品在柱中的保留时间很短，非常适用于生物活性成分的制备；正由于色谱柱的半径较小，因此色谱柱的压力也很小，所以大多数操作可以在低压下进行，这样对设备的要求就低。 由于低分子量置换剂的置换能力与流动相盐的浓度及置换剂的浓度有关，因此选择适合的实验条件，可以完成生物物质的选择性分离。 径向柱色谱 radial flow chromatography 优点（与传统的轴向色谱相比） 操作压力低 分离效率高 线性放大容易 样品处理量大 不足之处 色谱柱的装填比较麻烦，要求也较高。 通常柱体积越大时，径向流色谱表现出的优点越明显，但在色谱柱体积较小(100ml)，流速较低的情况下，径向流色谱的分离效果较轴向色谱差。 在惰性流动相中加入对固定相吸附或者溶解能力比所有组份都强的物质为顶替剂（或者直接用顶替剂做流动相)。 适合于制备纯物质或者浓缩分离某一组份，缺点是每经一次使用后，必须更新柱子 顶替法样品流出曲线 顶替色谱法 置换色谱(displacement chromatography) * 径向柱的外表面很大，因此能承载的样品量较多；如果增加色谱柱的长度，可以呈线性地增大色谱柱的制备量，而各组分的分辨率及保留时间没有多大的变化；径向柱色谱法由于流量很大，色谱柱的半径较小，因此样品在柱中的保留时间很短，非常适用于生物活性成分的制备；正由于色谱柱的半径较小，因此色谱柱的压力也很小，所以大多数操作可以在低压下进行，这样对设备的要求就低。 由于低分子量置换剂的置换能力与流动相盐的浓度及置换剂的浓度有关，因此选择适合的实验条件，可以完成生物物质的选择性分离。 * *