安丝菌素发酵实验.docVIP

摘要： 1 关键字： 2 1 前言 2 2 材料与方法 3 2.1 实验材料 3 2.1.1 主要实验试剂及仪器 3 2.1.2 实验菌株 3 2.1.3 培养基及发酵条件 4 2.2 发酵系统 4 2.3 菌体含量测定 4 2.4 糖含量测定 4 2.4.1 DNS及其葡萄糖标准溶液的制备 4 2.4.2 还原糖标准曲线的绘制 4 2.4.3 总糖标准曲线的绘制 5 2.4.4 还原糖的测定 5 2.4.5 总糖的测定 5 2.5 安丝菌素的分析方法 6 2.5.1安丝菌素提取 6 2.5.2 AP-3检测 6 3 结果与讨论 6 3.1葡萄糖标准曲线测定相关数据及结果 6 3.2总糖标准曲线测定相关数据及结果 6 3.3AP-3含量-峰面积标准曲线 7 3.4 发酵过程相关图表 7 3.5菌体生长分析 8 3.6糖浓度相关分析 9 3.7 补糖控制 9 3.8 AP-3产量分析 10 3.9发酵过程其他参数变化分析 10 3.10 发酵过程中的菌丝体形态 10 4四个小组的实验结果对比 12 4.1 四个小组不同的补糖策略 12 4.2 四个小组的糖浓度变化比较 12 4.3 四个小组的菌体浓度变化比较 13 4.4 四个小组的AP-3产量变化比较 14 5 结论与展望 14 5.1结论 14 5.2展望 15 参 考 文 献 16 抗癌药物安丝菌素P-3的发酵研究摸索 摘要：本实验在前人的实验基础上，研究了橙色束丝放线菌的生长变化与目的产物AP-3产量的变化规律得出，菌体对数生长初期AP-3已开始快速合成，发酵100h时，菌体浓度达到最大值14g/L后开始进入稳定期，AP-3合成速率开始变缓慢，发酵液体系中糖浓度较低，三者存在密切的关系。最终获得AP-3终浓度37mg/L，但与目前研究水平50~60mg/L的浓度还有一定的差距，整体发酵过程仍还有待通过工艺条件等方面进行改善。 关键字：发酵、AP-3 1 前言 美登醇是一类具有良好抗癌活性的化合物，安丝菌素是由橙色珍贵束丝放线菌，其中安丝菌素P-3(AP-3)的活性最为显著。β-D-葡萄糖基，并通过生物转化实验证明了该氨甲酰化是由基因簇中的基因asm21负责的。另外，从asm21基因缺失突变株中分离得到三个新产物，并以此为基础对Asm21进行了全面的生化分析。[5]但总体而言国内关于安丝菌素的相关研究相对于国外还有很大的差距，目前所能查到的公开发表的关于安丝菌素的文章也多出自国外的研究人员。 本实验在前人实践的基础上，通过5L小型发酵罐试验性的对橙色束丝放线菌2.1 实验材料表主要实验试剂 名称 规格 名称 规格 葡萄糖 分析纯，500g 甲醇 色谱纯，500ml 甘油 分析纯，500mL 乙醇 分析纯，500mL 酵母提取物 生化试剂，500g 氢氧化钠 分析纯，500g 磷酸氢二钾 分析纯，500g 盐酸 分析纯，500mL 七水合硫酸亚铁 分析纯，500g 3,5—二硝基水杨酸 分析纯，500g 异丁醇 分析纯，500mL 酒石酸钾钠 分析纯，500g 硫酸镁 分析纯，500g 苯酚 分析纯，500mL 玉米浆 分析纯，500g 氯化钠 分析纯，500g 牛肉浸膏 生化试剂，500g 无水亚硫酸钠 分析纯，500g 淀粉 分析纯，500g 表 2 主要实验仪器 名称 名称 离心机 烘箱 三角瓶 水浴锅 分析天平 比色管 高压灭菌锅 色谱柱 超纯水系统 微孔滤膜 生物反应器 精密酸度计 可见光分光光度仪 洁净工作台 循环水式多用真空泵 高效液相色谱仪 种子培养基(g/L)：酵母提取物10、牛肉浸膏10、葡萄糖5，甘油10、氯化钠3，灭菌前调节pH至7.4。 发酵培养基 (g/L)：葡萄糖10、甘油40、酵母提取物10、玉米浆5、磷酸氢二钾0.5、七水合硫酸亚铁0.002、异丁醇36mM。灭菌前培养基pH=7.4。装液量：3L；接种量：%；转速：rpm；温度：28℃。每隔12h取10~20ml发酵液循环水式多用真空泵2.4.1 DNS及其葡萄糖标准溶液的制备 2.4.1.1 DNS的制备 溶液A：称取分析纯NaOH 104g溶于1300 ml水中，加入30 g分析纯3,5-二硝基水杨酸。 溶液B：称取分析纯酒石酸钾钠910 g，溶于2500 ml水中，再称取25g重蒸苯酚和25g无水亚硫酸钠加入酒石酸钾钠溶液。将溶液A、B混合，加入1200 ml水，储存于棕色瓶中，暗处放置一周后过滤使用。 2.4.1.2 1mg/ml葡萄糖标准溶液的制备 称取于80℃烘箱中的葡萄糖100mg，溶于水中，定容至100ml。 2.4.2 还原糖标准曲线的绘制取7支25mL的比色管，按下表量取试剂还原糖标准曲线的绘制 试管号 0 1 2 3 4