结膜印迹细胞学—培训课件.pptVIP

结膜印迹细胞学 陈辉 美国DEAN A MCGEE 眼科研究所博士后 四川省人民医院眼科副主任医师 原 理 方 法 CIC的结果判定标准 CIC的临床意义 原 理 由于在各种致病因素（如： vit a缺乏，感染，过敏损伤等）的影响下，眼表细胞（结膜、角膜上皮、杯状细胞）在细胞间连接和细胞的形态、细胞的炎性标志的表达等方面将发生相应改变，这就为对眼表疾病的检测提供了病理学基础，传统的思维是对眼表进行刮片等侵入性方式作病理检查，但其敏感性、特异性均不令人狻Ｗ1977年，Egbert 在眼科使用醋酸纤维膜（Acetate Cellulose）以来，结膜印迹细胞学（Conjunctibai Impression Cytology）得以迅速发展。 ① 原 理 由于醋酸纤维膜为惰性物质，不与组织反应，无毒性，但具有粘附性，使其成为一种对眼表疾病进行非侵入性病检的理想工具，然后将所有取下的标本与传统的染色、免疫荧光、过氧化物酶染色、电泳等技术相结合，使眼科工作者能够对相关疾病作出早期诊断、治疗、预防。 ② 方 法 （一）传统细胞学检查： （二）免疫过氧化物酶染色： （三）免疫荧光染色： 目前，传统的细胞学染色方法甚多，染色原理基本相同，现仅简介其中的一种细胞学染色方法： 1，用醋酸纤维膜印取结膜、角膜细胞、分泌物并固定。 2，按序使用过碘酸、Shiff’s试剂、Mayer’s苏木精、95%乙醇、100%乙醇进行细胞染色。 （一）传统细胞学检查： ① （一）传统细胞学检查： 3，使用透明液（10%乙醇：冰醋酸=7:3体积比）对纤维膜进行透明。 4，载片镜检。 ② （二）免疫过氧化物酶染色： 1，用纤维膜印取标本并固定。 2，以磷酸缓冲盐为浴液，将标本先后置于抗体浴液（免抗HSV-1抗体，鼠抗VZX抗体）和商业用过氧化物酶—抗过氧化物酶试剂盒中培育。 3，镜检。 （三）免疫荧光染色： 1，用纤维膜印取标本。 2，将标本先后置于第一抗体（鼠抗-VZX抗体）和第二抗体（FITC标记的山羊抗鼠IgG抗体中。 3，荧光显微镜下镜检。 4，相对应，以HLA DR 的单克隆抗体，IgE受体的单克隆抗体为第一抗体，以fluroresccin isothlecyanate标记的抗鼠免疫球蛋白抗血清为第二抗体，可检测细胞炎性表达物。 CIC的结果判定标准 一、细胞学评价： 二、免疫过氧化物酶染色（+）： 三、免疫荧光学评价： 一、细胞学评价 1、评价内容: 2、Tseng的六级分类标准: 1、评价内容 (1)视野（1-3个）中杯状细胞存在与否及密度。 (2)上皮细胞核形态改变情况。 (3)上皮细胞核浆(N/C)比值。 (4)胞浆染色后颜色变化情况。 2、Tseng的六级分类标准: 0级：为正常细胞，上皮大小基本一致，胞浆呈蓝绿色，上皮细胞散在中等量杯状细胞，N/C=1:1但需注意杯状细胞密度随取材部位不同而存在生理分布差异。（高-）低：鼻侧睑结膜颞侧穹隆角巩膜缘) Ⅰ级：杯状细胞开始减小，但无角化，杯状细胞密度下降，结膜上皮细胞轻度扩大，胞浆仍呈蓝绿色，N/C=1/2～1/3. Ⅱ级：杯状细胞全部丧失，但无角化，所有结膜上皮细胞均扩大变扁，胞浆蓝绿色或粉红色，N/C=1/4. ① 2、Tseng的六级分类标准: Ⅲ级：早期轻度角化。所有上皮细胞胞浆均呈粉红色，上皮明显角化，部分胞浆内可见角蛋白，N/C=1/6. Ⅳ级：中度角化，除上述Ⅲ级改变外，许多细胞内见大量堆积的角蛋白及角质透明蛋白颗粒，胞核固缩或崩解成碎片。 Ⅴ级：严重角化，上皮胞浆浓缩，可见大量角蛋白、胞核固缩或崩解成碎片。 ② 三、免疫荧光学评价： 1，正常人：针对Ⅱ类抗原HLA DR和IgE受体CD23的免疫细胞学为阴性，但少数人孤立的树突细胞和抗-HLA DR单克隆抗体强反应，但不和抗CD23单克隆抗体反应，有10%的人的标本对抗-HLA DR抗体和/或抗CD23抗体产生小部分细胞弱反应。 2，慢性结膜炎：在大部分结膜炎中都和单克隆抗体强烈反应。在大部分标本中，两种抗体皆反应，但 HLA DR阳性细胞反应更常见，在应用激素的患者因免疫抑制作用，标本可呈阴性。 ① 三、免疫荧光学评价： 3，泪液缺陷患者： 24 名临床干燥角化异物患者两种抗体(一). 2名Sjogren’s Syndrome患者HLA DR(+)(90-10%的结膜细胞)：IgE受体(一) ，（10%结膜细胞阳性 Stevens-Johnsen Syndrome患者HLA DR(+),IgE受体（+）（95%的结膜细胞阳性）。 8个标本泪液缺陷者对HLA DR,IgE受体示若阳性。 4 ，在