高效液相法测人皂苷.docVIP

以测Re、Rg1为例 1 色谱条件的选择 1.1采用C18（4.6mm×250mm，5um） 1.2流动相 乙腈(A) - 水(B)，20:80 1.3流速1.0mL/min 1.4波长的选择（203nm） 以人参皂苷对照溶液在200 ~ 300nm 范围进行光谱扫描测定, 结果人参皂苷 在 nm 波长处有最大特征吸收, 选择 nm作为人参皂苷 的测定波长。 1.5温度30 1.6进样量10ul 2 溶液制备 2.1对照品溶液的制备 精密称取干燥的人参皂苷Re对照品5.790mg 人参皂苷Rg1对照品6.325mg，置于50mL的容量瓶中，加入甲醇进行溶解并稀释至刻度，摇匀，后静置，即得对照品溶液( 其中含有人参皂苷Rg10.1235mg/mL，人参皂苷Re0.1028mg/mL)。 2.2 供试品溶液的制备 取样品2g，至于具塞锥形瓶中，加甲醇5ml,超声10min,离心15min，转速为2500r/min，取上清液过滤，甲醇定容至5ml。加5ml水饱和正丁醇萃取两次，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇定容至5ml。 2.3 阴性样品溶液的制备 取缺少人参的其他药材，制成缺少人参的阴性样品，再按照2.2项下的步骤制成阴性样品溶液。 3 系统适应性试验 取对照品溶液供试品溶液阴性对照品溶液按照1项下的色谱条件，分别将3种溶液以 10ul进样，测定分离度,均应≥1.5，色谱峰对称性，理论塔板数，说明空白对照样品的测定无干扰性。 4 线性关系考察 分别精密取2.2项下的供试品溶液1、2、4、6、8、10、12 uL，按照1项下的色谱条件进样测定，以峰面积( Y) 对浓度( X) 进行线性回归，回归方程分别为( r=) 结果表明人参皂苷在 g范围内线性关系良好。 5 精密度考察 取2.1项下方法制备的对照品溶液10.0u L，在1色谱条件下依法重复进样6次，记录其峰面积，结果表明峰面积的RSD为 %，表明其精密度良好。 6 稳定性考察 取同一批供试品溶液，分别于0、 2、 4、 8、12、24、36、48h，精密吸取溶液10 uL，注入高效液相色谱仪中，按照1项下进行测定，记录色谱峰面积 结果峰面积的RSD为 %，表明样品溶液在48h内基本稳定。 7 重复性考察 取同一批号的样品溶液，按照上述2.2项下方法得供试品溶液5份，按照含量测定法，分别精密吸取10u L，按照1色谱条件，测定峰面积，结果峰面积的RSD为 %，表明该含量测定方法重复性良好。 8 回收率试验 精密吸取5份已知含量的样品20mL置于50mL的容量瓶中，各瓶中分别精密加入标准混合的储备液5.0、 5.0 、7.0 、7.0 、9.0、 9.0mL，加流动相稀释至刻度照1项下的色谱条件进行测定，平均加样回收率为 %，RSD为 %。 9 样品含量测定 取3批样品，按照2.2项下方法配制成供试品溶液，精密吸取10u L溶液，按照1色谱条件进行测定，同时按照外标一点法进行计算3批供试品的含量测定。 组分 色谱柱 流动相 流速 温度 1 Rb1Rb2Rc RdReRg1 F1 F2 Rg3Rh1 Rh2C-K PPD 250mm*4.6mm，5um 水（A）—乙氰（B） 0(77%） →13(77%）→ 33(56%） →38(32%）→45(32%） →55(0%） 60(0%）→ 63(77%） 1.0ml/min 25 2 Rg1 Re 250mm*4.6mm，5um 二元梯度洗脱，需两个高压泵 0.1mol/LKH2PO4（A） ，为乙腈∶ 水=75∶25，PH=3.5（B） 1.0ml/min 38 3 Rg1 200mm*4.6mm，5um 乙 腈- 水 ( 20 : 80 ) 1.0ml/min 室温 4 Rg1 、Re 、R f、Rg 2 、Rb1 、Rc、Rb2、Rb3、Rd 150mm*4.6mm，5um 乙腈( A) - 水(B) 0(18% )→ 24(22%)→ 26(26%)→ 30(32%)→ 50(33.5%)→ 55(38%) 1.0ml/min 35 5 Rg1 Rb1 250mm*4.6mm，5um 乙腈( A) - 水(B) 10(81% )→35(81-71%)→ 50(71%) 1.2ml/min 30 6 Rg1 150mm*4.6mm，5um 乙 腈- 水 ( 25 : 75 ) 1.0ml/min 30 7 Rg1 Rb1 250mm*4.6mm，5um 乙腈- 0.05%磷酸水溶液(18：82) 1.0ml/min 30 8 Rg1 Re Rb1 150mm*4.6mm，5um 乙腈( A) - 水(B) 0(19% )→ 35(19-2