高效液相法测定品中合成着色剂的确认报告.docVIP

高效液相法测定食品中合成着色剂的确认报告 陈爱民 魏文 魏嘉良 （广州中科检测技术服务有限公司） 方法依据 本报告依据为： GB/T 5009.35-2003，中华人民共和国国家标准 食品中合成着色剂的测定。本法适用于食品中合成着色剂的测定。 方法原理 食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。 仪器和试剂 仪器器材 3.1.1 高效液相色谱仪，带紫外检测器，254nm波长。 试剂 3.2.1 正己烷。 3.2.2 盐酸。 3.2.3 乙酸。 3.2.4 甲醇：经0.5μm滤膜过滤。 3.2.5 聚酰胺粉（尼龙6）：过200目筛。 3.2.6 乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45μm滤膜过滤。 3.2.7 氨水：量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。 3.2.8 氨水-乙酸铵溶液（0.02mol/L）：量取氨水0.5mL，加乙酸铵溶液（0.02mol/L）至1000mL，混匀。 3.2.9 甲醇-甲酸(6+4)溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。 3.2.10 柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸(C6H8O7·H20),加水至100mL，溶解混匀。 3.2.11 无水乙醇-氨水-水(7+2+1)溶液：量取无水乙醇70mL，氨水20mL，水10mL，混匀。 3.2.12 三正辛胺正丁醇溶液(5%)：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。 3.2.13 饱和硫酸钠溶液。 3.2.14 硫酸钠溶液(2g/L)。 3.2.15 pH6的水:水加柠檬酸溶液调pH值到6。 3.2.16 合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝各0.100 g置100mL容量瓶中，加pH6水至刻度，配成水溶液（1.00mg/mL）。 3.2.17 合成着色剂标准使用液：临用时上述溶液（或将3.2.16）加水稀释20倍，经0.45μm滤膜过滤，配成每毫升相当于50.0μg的合成着色剂。 4.测定方法 4.1色谱条件 柱：YWG-C18 10μm不锈钢柱4.6mm（i.d）×250mm。 流动相：甲醇：乙酸铵溶液（pH=4，0.02mol/L）。 梯度洗脱：甲醇：20%～35%，3%/min；35%～98%，9%/min；98%继续6min。 流速：1mL/min。 紫外检测器：254nm波长。 4.2测定 取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。 4.3 样品测定 4.3.1 桔子汁、果味水、果子露汽水等：称取20.0g～40.0g,放入100mL烧杯中含二氧化钠试样加热驱除二氧化碳。 4.3.2 配制酒类：称取20.0g～40.0g，放100mL烧杯中,加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。 4.3.3 硬糖、蜜饯等、淀粉软糖等：称取5.00g～10.00g粉碎试样，放入100mL小烧杯中，加水30mL，温热溶解，若试样溶液pH较高，用柠檬酸溶液调pH值到6左右。 4.3.4 巧克力豆及着色糖衣制品：称取5.00g～10.00g，放入100mL小烧杯中，用水反复洗涤色素，到试样无色素为止，合并色素漂洗液为试样溶液。 4.3.5 色素提取 聚酰胺吸附法：试样溶液加柠檬酸溶液调pH值到6，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入试样溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60℃pH=4的水洗涤3次～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次～5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经0.45μm滤膜过滤，取10μL进高效液相色谱仪。 4.4 结果计算 试样中着色剂的含量按下式进行计算。 式中： X——试样中着色剂的含量，单位为克每千克（g/kg）； A——样液中着色剂的质量，单位为微克（μg）； V2——进样体积，单位为毫升（mL）； V1——试样稀释总体积，单位为毫升（mL）； m——试样质量，单位为克（g）。 计算结果保留三位有效数字。 5 结果与讨论实际样品的测定及加标回收率用本法对进行了测定，并测定了其加标回收率结果见表。 质量 加标前测定值 加标量 加标后测定值 可乐 20.13g 20.08mg 10.0mg 29.11mg 90.2% 可乐 20.07g 20.08mg 30.0mg 48.64mg 95.2% 硬糖 5.35g 19.44mg 10.0mg 29.26mg 93.1% 硬糖 5.36g 19.44