高中生物同步课件：6.2DNA片段的扩增——PCR技术(中图版选修1).pptVIP

要点三　实验操作与结果分析 1.检测PCR扩增效果的过程 2.结果分析 DNA片段的扩增是否成功的判断 (1)对于电泳检测的方法，可以通过在紫外线下直接观察DNA带的分布及粗细程度来评价扩增的效果。 (2)扩增不成功的可能原因有： ①漏加了PCR的反应成分； ②各反应成分的用量不当； ③PCR程序设置不当等。 在PCR扩增DNA的实验中，预计一分子DNA经过30次循环后，应该得到230个DNA分子，但是结果只有约210个DNA分子，那么不是出现该现象的原因是(　　) A．Taq DNA聚合酶的活力不够，或活性受到抑制 B．系统设计欠妥 C．循环次数不够 D．复性时，部分亲链与亲链结合 例3 【解析】　如果Taq DNA聚合酶活力不够，或活性受到抑制，则导致催化效率降低，得到的产物比预期的少。如果PCR系统设置不妥，达不到预期的结果。复性时，模板链既可以和引物结合，互补的模板链也可相互结合，从而导致产物减少。 【答案】　C 变式训练 DNA在______nm的紫外线波段存在一强烈的吸收峰，其峰值的大小与DNA含量有关(　　) A．220　　　　　　　 B．240 C．260 D．280 解析：选C。DNA在260 nm的紫外线波段存在一强烈的吸收峰，其峰值的大小与DNA含量有关。据此，可以进行DNA含量的测定。 栏目导引 新知初探思维启动 要点突破讲练互动 知能演练轻巧夺冠 第六章　 蛋白质和DNA技术 第2节　DNA片段的扩增——PCR技术 学习导航 1.理解PCR扩增DNA片段的原理。[重点] 2.尝试PCR技术的基本操作和应用。 [难点] 新知初探思维启动 一、DNA在细胞内的复制 1.所需的酶：___________酶、DNA聚合酶和RNA聚合酶等。 2.引物：___________。 3.原料：__________________。 4.原则：___________________。 DNA解旋 一段RNA 四种脱氧核苷酸 碱基互补配对原则 二、PCR及其过程 1.概念：PCR即聚合酶链式反应，实际上是在_____模拟细胞内的_______________，形成大量__________的DNA片段。 体外 DNA复制过程 特异性 2.过程 条件 过程 加样 室温 把PCR缓冲液、_________、一对引物、四种脱氧核苷酸、DNA聚合酶、Mg2＋等成分加入到微量离心管中 DNA模板 氢键 一对引物 DNA聚合 脱氧核苷酸 判一判 (1)细胞内DNA复制和PCR技术所需的引物一样，都是RNA。(×) (2)经PCR技术合成的DNA分子中，每条单链都含有引物。(×) (3)PCR实验的原理和操作都十分复杂，不易于操作。(×) (4)经过高温变性、低温复性和中温延伸三步操作，DNA片段可呈指数增长。(√) 三、实验操作 1.准备 (1)为了避免__________等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、吸头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行_________。 (2)如果没有PCR仪，可以设置3个恒温水浴锅，温度分别为______、______和______，然后按要求在3个水浴锅中来回转移PCR的微量离心管即可。 外源DNA 高压灭菌 95 ℃ 55 ℃ 72 ℃ PCR热循环 260 nm 想一想 决定PCR反应特异性的原因有哪些？ 【提示】　待扩增DNA片段的特异性。 要点突破讲练互动 要点一　PCR技术与体内DNA复制的比较 细胞内复制 PCR反应 解旋 在解旋酶作用下,细胞提供能量，部分解开 加热至90 ℃以上时，双链全部解开 酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶 耐高温的DNA聚合酶 引物 一小段RNA 单链DNA 细胞内复制 PCR反应 能量 ATP 不加 循环次数 生物自身控制 30多次 子链合成 一条链连续合成,另一条链不连续合成 两条子链为连续合成,温度为72 ℃ 产物 完整DNA DNA片段 相同点 ①需提供DNA复制的模板 ②四种脱氧核苷酸为原料 ③碱基互补配对原则 ④子链延伸的方向都是从5′端到3′端 特别提醒　①PCR反应需要可变的温度，而体内DNA复制需要稳定的温度。 ②DNA解旋酶的作用是使DNA两条链的氢键断开；DNA聚合酶的作用是将单个脱氧核苷酸加到已有的单链片段的3′端上，需要模板; DNA连接酶连接的是两条DNA片段的缺口，不需要模板。 PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是(　　) ①PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA ②PCR过程不需要DNA聚合酶 ③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的 ④PCR过