实验1大肠杆菌的培养与分离(浙科版选修1).pptVIP

浙科版生物选修（1）生物技术实践IB模块;1-1什么是生物技术;1-2 传统生物技术;1-3 现代生物技术;一、细胞工程;二、发酵工程;蛋白质工程主要包括了解合成蛋白质的DNA编码序列、蛋白质的分离纯化、蛋白质的序列分析和结构功能分析、蛋白质结晶和结构力学分析等。 ; 酶工程即利用基因工程等手段，改变酶或蛋白质的折叠方式、空间结构、催化活性和稳定性等;选修1需学习的实验;实验1 大肠杆菌的培养和分离;一、基础知识 ;微生物包括哪五类：;1放线菌;链霉素、土霉素、四环素、 氯霉素、红霉素、庆大霉素 ;2病毒的结构;朊病毒（蛋白质病毒）;病毒的增殖：;3真菌;;4细菌的外形与大小;细菌细胞由外向里依次有鞭毛、菌（纤）毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞质、 拟核，细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核质等。;*细胞壁;芽孢;菌落：;菌落;5细菌的营养物质 ;根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。 自养菌: 异养菌: 腐生菌 寄生菌 大部分病原菌 ;（二）培养基 ;液体培养基：;固体培养基：菌落，菌苔;半固体培养基：;选择培养基;鉴别培养基; 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;; 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 ;血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子； ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分;3.培养基内所含的基本物质;(2)碳源;(3)氮源;不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方;3培养基配制原则：;（三）无菌技术;（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 ;（１）消毒定义：;1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 如牛奶的消毒 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……;灭菌;干热灭菌 160－170℃ ；1－2h; 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。 而培养皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 ;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？;大肠杆菌的培养和分离;3.微生物实验室培养的基本操作程序;二、实验操作;二、实验操作;大肠杆菌的培养和分离实验操作;2、纯化大肠杆菌;1．计算、称量 2．溶化 3．调pH：　pH7．6　 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎; 8．灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。;倒平板技术;平板划线的操作;不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。;;;微生物的恒温培养;微生物的恒温培养;四、课题成果评价 ;注意事项: 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次. 2.划线首尾不能相接 3.划线后,培养皿倒置培养12~24h; 1.培养基灭菌后，需要冷却到