肠道病毒蛋白酶在大肠杆菌中的表达及活性研究.pdfVIP

第 卷 第 期 病 毒 学 报 ２８ ３ Ｖｏｌ．２８ Ｎｏ．３ 　 　　 　　 　　 　 年 月 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　 ２０１２ ５ ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＶＩＲＯＬＯＧＹ Ｍａ ２０１２ 　　　 　 　 　 ｙ 　 肠道病毒 型 蛋白酶在大肠杆菌中的表达及活性研究 ７１ ３Ｃ ＊ ＊ ， ， ， ， ， 陈丽 杨志建 周正 蔡威特 滕新泽 张高峡 （ ， ） 上海泽润生物科技有限公司疫苗研发中心 上海 ２０１２０３ ： ， ， 。 ， 摘要 本研究利用大肠杆菌表达系统构建肠道病毒 型 蛋白酶 并进行纯化 对其酶活性进行研究 首先 将 ７１ ３Ｃ ， （ ） ， ， 蛋白酶基因克隆至 载体 在大肠杆菌 中表达 柱亲和层析纯化获得 蛋白酶 经 ３Ｃ ＥＴ２８ａ ＢＬ２１ ＤＥ３ ＮｉＮＴＡ ３Ｃ ｐ － ， 。 肠激酶酶切去除 端 标签后获得无 标签的 蛋白酶 再以荧光多肽为底物进行酶活性研究 经过双酶 Ｎ Ｈｉｓ Ｈｉｓ ３Ｃ ， ， ； 切鉴定和测序证实 重组表达质粒 构建正确 表达的重组 蛋白酶相对分子质量约 纯化后有无 ＥＴ２８ａ３Ｃ ３Ｃ ２２ｋＤ ｐ － ， ， 标签的 蛋白酶均能催化荧光底物 并且两者的酶动力学数据无显著差异 含有 标签的 蛋白酶 Ｈｉｓ ３Ｃ ３Ｂ３Ｃ Ｈｉｓ ３Ｃ － －１ －１ 、 、