吸光光度法54学时2009).pptVIP

第九章 吸光光度法 第一节 概 述 一、吸光光度法的特点： （1）根据物质对光辐射的吸收来进行 分析的一种方法。 目视比色法：比较有色溶液颜色深浅来 测定其中有色物质的含 量。 ; 吸光光度法或分光光度法： 通过有色溶液（甚至是无色溶液）对某一波长光波的吸收情况来测定待测组分的含量。 （2）测定低含量组分，甚至可测定痕 量组分。 （3）操作简便、快速、仪器设备也不 复杂。;二、光辐射的基本性质 光具有波动性和粒子性。 ;三、辐射能与分子的作用--- 吸收光谱的产生 当原子选择吸收了某些波长的电磁波就 会产生电子跃迁，形成了原子吸收光 谱，这是一种不连续的线状光谱。 ;分子吸收光谱： 由于电子跃迁引进，但谱图复杂，原子 有不同的电子能级，同一电子能级分为 振动能级，同一电子能级和同一振动能 级，又分为转动能级。其谱图为带状光 谱。;四、物质的颜色和光的选择性吸收 单色光：单一波长的光。 复合光：由不同波长的光组合而成的 光。 互补光：把两种适当颜色的单色按一定 强度比例混合而得到白光，这 两种单色光称为互补光。 ;溶液透明无色：当一束白炽光通过某溶 液时，如果该溶液对可见光区域各波段 的光都不吸收，即入射光全部通过。 溶液的颜色：溶液给出的颜色是它吸收 光的互补色。 紫外光的波长范围：200-400 nm 可见光的波长范围：400-760 nm;吸收曲线： 测量某溶液对不同波长单色光的吸收程 度，以波长为横坐标，吸光度 A 为纵坐 标，即得一曲线。其中光吸收程度最大 的波长位置叫最大吸收波长，以λ最大 （或λmax）表示。;第二节 朗伯-比耳定律 当一束单色光通过含有吸光物质的稀溶 液后，溶液的吸光度 A 与吸光物质的浓 度及吸收层厚度成正比。 ; T：透光率； b: 液层厚度（比色皿厚度）； c :物质的浓度。 K 值随 c, b 所取单位不同而不同： ;（1）如 c 以 g/L, b 以 cm 表示时， 则常数 K 以 a 表示，称为吸光系 数，单位：L(g.cm) （2）若 c 以 mol/L，b 以 cm 表示 时，则 K 用另一种符号ε表示， ε称为摩尔吸光系数，其单位 为： L/(mol.cm) 此时： A=εbc 不同物质的摩尔吸光系数值ε不同。;第四节 光度分析的步骤 一、显色剂的选择 （1）反应的选择性好，干扰少，或干扰容 易消除。 （2）生成的有色化合物有较高的摩尔吸光 系数，灵敏度足够高，适用于试样中 待测物质的含量范围。 ;二、实验条件的选择 （一）溶液的酸度 酸度直接影响显色剂的浓度和生成物的 颜色。 （二）显色剂用量 为了使显色反应进行完全，需加入过量 显色剂，在实际工作中，通常根据试验 来确定。 ;（三）显色时间及颜色的稳定性 必须通过试验来确定在最合适的时间内进行测定。 （四）温度 大多数的显色反应在室温下进行，但有些显色反应必须加热至一定的温度和一定时间才能完成。 ;（五）溶剂 有机溶剂对显色反应的影响为： （1）影响络合物的离解度； （2）影响反应速度。 ;（六）干扰物质的影响及消除方法 （1）干扰物质本身有颜色或与显色剂 形成有色化合物，在测量条件下 也有光吸收。 （2）在显色条件下，干扰物质析出沉 淀或使溶液混浊，以致无法进行 光度测量。 （3）与待测离子形成更稳定的络合。 ;消除办法： （1）控制酸度； （2）加入适当掩蔽剂； （3）选择适当的测量波长； （4）选择适当的参比溶液。 ;三、分析波长的选择 （1）如果不存在其它有色物质的干 扰，则选择待测有色物（或显色 剂生成的产物）的最大吸收波长 的光波作为入射光进行光度测 定。 ;（2）如果显色剂本身有颜色，且在有 色物质的最大吸收波长下也有光 吸收，最好选择有色物质有较大 光吸收的波长而显色剂（或其它 有色物质）在此波长下的光吸收 为零的单色光作为入射光。;四、参比溶液的选择 （1）当试液本身及显色剂均无色，可用