侧孢芽孢杆复合试验操作指引.docVIP

侧孢芽孢杆菌复合试验操作指引 一、实验目的 ???检测在不同养分、水分、何剂型情况下，生物肥产品中有效活菌数衰减情况，为产品开发提供数据。? 二、实验原理 ???NY884生物有机肥和NY/T798复合生物肥标准 三、实验材料 1.菌种：侧孢芽孢杆菌 2.物料：泥炭土、豆饼粉、麸皮、干粉、水等 3.器材：500ml三角瓶、样品袋 ? 四、方法步骤 1. 物料准备 1.1用不同的物料分别配制养分含量≥6％、10％、18％ 编号为A、B、C的三种物料各7.2公斤，每个样品做8次平均分装，编号依次是A1~A8 、B1~B8 、 C1~C8 ，混配均匀，用样品袋装好。 1.2，将1.1中A1~A4 、 A5~A8烘干或是加于适量使水分分别在≤20％、25％的含量。物料B1~B4、B5~B8 ；C1~C4、C5~C8的各个样品依次也做如上处理。 2. 接种 2.1菌种处理 。按目标要求分别加人10g/KG、20g/KG的菌剂，为了将菌种与物料充分混匀，将菌种和干粉按1：9、1：4的 比例混匀，各得到100g,菌剂混合物。 2.2 物料与菌种复合物混配。将准备好的以不同比例混匀的菌剂混合物，加入不同养分水分的分别A1~A2、A3~A4即得到有效活菌数按理论0.5亿/克和1.0亿/克的二种复合微生物肥料粉状样品，依次处理A5~A6、A7~A8；同理分别处理B1~B8 、 C1~C8。 3. 造粒 将混好的不同养分水分接种量的A1、A2按菌剂与肥料复合“造粒”和“肥料造粒后加粉状菌剂设计二个处理” 4. 保藏 将造粒后的样品用样品袋装好? 五、检测项目和频率 1 首次检测：为常规全检和有效活菌数、杂菌率检测。 1.1培养基：蛋白胨? 10.0 g 牛肉膏?? 3.0 g氯化钠(NaCl)???? 5.0 g琼脂??? 18.0 g 蒸馏水?1 000 mL pH? ? 7.2～7.5 1.2器皿准备：无菌水150ml药瓶12个，无菌水9ml试管72支，营养琼脂平板48套 项 目 剂 型 粉 剂 颗 粒 有效活菌数(cfu) ，亿/g ≥ 0.20 0.20 有机质（以干基计），% ≥ 25.0 25.0 水分，% ≤ 30.0 15.0 pH值 ? 5.5~8.5 5.5~8.5 粪大肠菌群数，个/g(mL) ≤ 100 蛔虫卵死亡率，% ≥ 95 有效期，月 ≥ 6 侧孢芽孢杆菌复合试验（2011.3.31） 1#6％ 2#6％、、 3#10％ 4#18％ 泥炭土 60 60 60 60 尿素 5 5 10 10 硫酸铵 10 10 10 5 一铵 5 5 7 12 氯化钾 10 黑轻钙 32 22 15 5 轻钙 生物菌16亿 10 10 10 生物菌2 菌剂稀释 按轻钙：菌剂= 1；2的比例混配均匀，得到90g粉状菌剂。 物料混配 分别以表格所示的物料量，依次称取泥炭土、尿素、硫酸铵、一铵、干粉等物料，混配均匀，得物料180g. 菌剂和物料混配。将混匀的菌剂和物料混合，用样品袋装好。 检测； 检测1号样品的PH、养分、水分 结果（2011-4-6）N+P+K= 2.24+ 2.56+ 1.37=6.17 PH=5.6 　　　　　侧孢芽孢杆菌摇瓶试验 一、摇瓶制备 侧孢芽孢杆菌摇瓶培养基配置 Ａ、试验目的：制备摇瓶种 Ｂ、试验材料：500ml摇瓶4个，二代斜面3支，无菌数9ml5支，接种环3支，酒精灯，火柴等。 Ｃ、摇瓶营养液配制： 1、分别依次称取蔗糖1.5%（12g）、蛋白胨0.5%(4g) 、酵母膏0.6%(4.8g) 、豆粕粉0.3%(2.4g) 、玉米粉0.5%(4g) 、硝铵0.2%(1.6g) 、磷酸氢二钾0.1%(0.8g) 硫酸镁0.03%(0.24g) 、硫酸锰0.004%(0.032) 、碳酸钙0.5% (4g) 于1000ml烧杯中，加入H2O=800ml加温溶解，待溶解完后，边滴加1mol/LNaOH边搅拌使PH达到7.2~7.4。 2、充分溶解混合后，分装于500ml的三角瓶各200ml，加绵塞包扎好。 ３、 １２１℃、３０分钟高温灭菌。 4、灭完菌后，取出摇瓶放置无菌操作台，第二天备用。 接种： A 、准备工作：无菌操作台打开紫外灯灭菌３０分钟， ，灭菌好的９ｍｌ试管无菌水５支，第二代侧孢4支、 接种环，酒精灯，火柴，７５％酒精一瓶。 B、用７５％酒精擦洗手和桌面后晾干后，点燃酒精灯。分别取一支无菌水，和斜面，移置火焰上过几遍后 打开塞子，将无菌水倒入斜面。 C、取接种环在火焰上烧红接头及金属炳，待冷却后，伸入斜面将菌苔来回几次刮掉，振荡几次，制成菌悬液。 D、取事先编号为1—4的含培养基的三角瓶1号，在火焰旁打开牛皮纸，将绵塞及瓶口对准火焰过数次后，打开绵塞