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中和试验 病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力，谓之中和试验。本试验主要用于：①从待检血清中检出抗体，或从病料中检出病毒，从而诊断病毒性传染病；②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型；③测定抗病毒血清或抗毒素效价；④新分离病毒的鉴定和分型，中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行，亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。 （一）简单定性中和试验 本法主要用于检出病料中的病毒，亦可进行初步鉴定或定型。先根据病毒易感性选定试验动物（或鸡胚、细胞培养）及接种途径。将病料研磨，并稀释成一定浓度（约100 LD50～1 000LD50或TCID50）。污染的病料需加抗生素（青霉素、链霉素各200～1 000单位），或用细菌滤器过滤，与已知的抗血清（适当稀释或不稀释）等量混合，并用正常血清加稀释病料作对照。混合后置37℃1h，分别接种实验动物，每组至少3只。分别隔离饲喂，观察发病和死亡情况。对照动物死亡，而中和组动物不死，即证实该病料中含有与该抗血清相应的病毒。本法亦可用于毒素（如肉毒毒素）的鉴定和分型。 （二）固定血清稀释病毒法 本法多将病毒作10倍递增稀释，分置2列试管，第一列加正常血清（对照组），第二列加待检血清（试验组）。混合后，置37℃作用1h，将各管混合液分别接种选定的试验动物，每一稀释度用3～5只动物。接种后，逐日观察，并记录其死亡数，观察结束后，计算LD50和中和指数（表7-1、表7-2），本法适用于大量检样的检测。 表7-1 固定血清稀释病毒法术式 混合前 病毒稀释 2×10-1 2×10-2 2×10-3 2×10-4 2×10-5 2×10-6 2×10-7 - 正常 血清 稀释病毒 - - - 1.0 1.0 1.0 1.0 - 正常血清 - - - 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 对照组 稀释液 - - - - - - - 1.0 待检血清 稀释病毒 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 - 待检血清 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 中和组 稀释液 - - - - - - - 1.0 混合后病 毒稀释 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 表7-2固定血清稀释病毒法中和试验（例一） 病毒稀释 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 LD50［2］ 中和指数 正常血清对照组 - - - 4／4［1］ 3／4 1／4 0／4 10-5.5 103.3＝1.995 待检血清中和组 4／4 2／4 1／4 0／4 0／4 0／4 0／4 10-2.2 注：［1］分母为接种数，分子为死亡数； ［2］LD50计算见实例。 中和指数＝中和组LD50/对照组LD50=10-2.2/10-5.5=103.3 查3.3反对数是1.995，故中和指数103.3＝1.995。也就是说该待检血清中和病毒的能力为正常血清的1.995倍。本法多用以检出待检血清中的中和抗体，对病毒而言，通常中和指数大于50者判为阳性，10～49为可疑，小于10为阴性。 （三）固定病毒稀释血清法 本法用以测定抗病毒血清的中和价，将待检血清2倍递增稀释，加等量已知毒价的病毒液（与血清混合后，每一接种剂量含病毒100LD50），摇匀后，置37℃作用1h，接种实验动物（表7-3）。 表7-3 固定病毒稀释血清中和试验(例二)[1] 血清稀释度[2] 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 - 血清中和价（PD50）[4] 正常血清 0/4[3] - - - - - - - - - - 康复血清 4/4 4/4 4/4 3/4 2/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 1:141 免疫血清 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 2/4 0/4 0/4 1:1280 注：[1] 接种剂量0.1ml，含病毒100LD50； [2] 系指与病毒混合后的稀释度； [3] 分母为接种数，分子为保护数； [4] PD50为半数保护，其计算法同LD50的计算。 （四）空斑减少法 在细胞培养上进行病毒中和试验，近年来多采用空斑减少法。先将病毒稀释成适当浓度，使每0.2ml含80个～100个PFU（空斑形成单位），与不同稀释度的待检血清等量混合，置37℃作用1h～2h，分别测定PFU，使空斑减少