固相合成法制备环肽Hymenistatin1及其含statine的类似物论文.docVIP

　　固相合成法制备环肽Hymenistatin1及其含statine的类似物论文 【摘要】 目的 研究固相合成法制备Hymenistatin1［HS1，序列为cyclo(ProProTyrValProLeuIleIle)］及其statine类似物的工艺步骤和影响因素。方法 采用Fmoc或Boc保护α氨基，以HBTU/NMM为缩合剂进行直链肽接肽反应、以BOP/HOBt/DIEA为缩合剂进行环化固相合成HS1及其类似物。用色谱仪和质谱仪对合成的环肽及其杂聚肽类似物进行纯化鉴定。结果 多肽合成收率可达65%，经反相高效液相色谱(RPHPLC)柱对合成的多肽进行纯化后纯度均达到90%以上，通过基质辅助激光解吸附电离飞行质谱仪(MALDIMS)检测所合成的环肽及环肽类似物的分子质量与理论分子质量相符。结论 成功合成出了较高纯度的目标多肽化合物。 【关键词】 固相多肽合成； HS1； Statine类似物； 纯化 ABSTRACT Objective Preparation of Hymenistatin1 ［HS1, cyclo(ProProTyrValProLeuIleIle)］ and its four statineanalogues by solidphase peptide synthesis method, and the synthesis process and influencing factors oc or Boc protected αamino acids, HBTU/NMM as coupling reagent (linear peptide synthesis) and BOP/HOBt/DIEA as cyclizing reagent, the cyclooctapeptide HS1 and its analogues olecular ass spectrogram. Conclusion The target peptide pounds enistatin1(HS1)是由Pettit等［1］从太平洋Hymeniacidon海绵中分离得到的一种环八肽。肽链序列为：cyclo(ProProTyrValProLeuIleIle)。有报道称HS1在小鼠成淋巴细胞白血病P388的研究中具有抑制细胞生长的作用，但结果并没有在后续的研究中得到充分证实［2］。 Cebrat等［3］揭示了H1具有抑制体液和细胞免疫反应的免疫抑制作用。 Poojary等［4］合成的HS1显示出对细菌生长的抑制作用，但对真菌的抑制作用不强；HS1的驱虫作用不大，但表现出一定的抗炎症作用。Zubrzak等［5］用1.freeloFinnigan公司)，紫外分光光度计(Beckman DU7400，美国Beckman公司)，C18反相分析柱(Sepax GPC18，5μm，120，4.6mm×150mm)。 实验所用FmocProMerrifield Resin(取代值0.291mmol/g，交联度1%，100～200目)、BocValF(二甲基甲酰胺)、DMSO(二甲亚砜)、DCM(二氯甲烷)、A(乙腈)、EDC［1乙基3(3二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐］、NMM(N甲基吗啉)和苯甲硫醚均由杭州中肽生化有限公司提供，哌啶经重蒸后使用，水为二次去离子水。 1.2 HS1及其类似物的化学合成 本文所合成的5种环肽序列分别为： HS1：cyclo(Ile1Ile2Pro3Pro4Tyr5Val6Pro7 Leu8)； A1HS1：cyclo(Ile1Ile2statine3Pro4Tyr5Val6 Pro7Leu8)； A2HS1：cyclo(Ile1Ile2Pro3statine4Tyr5Val6 Pro7Leu8)； A3HS1：cyclo(Ile1Ile2Pro3Pro4Tyr5Val6 statine7Leu8)； A4HS1：cyclo(Ile1Ile2statine3statine4Tyr5 Val6Pro7Leu8)。 虽然这5种环肽或环肽类似物的序列如上面所表示的非常相似，并且按照顺序给每个氨基酸残基做了编号，但考虑到每个化合物的疏水性和空间位阻可能并不完全相同，加之合成的线性肽链终究要环化成环肽，因此，为了方便、有效地合成目的产物，我们选择接肽反应的第一个氨基酸也不尽相同。 (1)HS1的合成路线与纯化 树脂溶胀 调用自编程序Method1，树脂溶胀的