耐吉非替尼的肺癌细胞株的建立及其耐药机制研究.docVIP

耐吉非替尼的肺癌细胞株的建立及其耐药机制研究 [摘要]目的：探讨耐吉非替尼的肺癌细胞珠的建立及其耐药机制研究。方法：本次研究取吉非替尼加入到人肺癌细胞系PC9培养条件中培养直至耐药情况产生，回顾相关特点及耐药机制。结果：应用0.5μmol·L-1吉非替尼向普通PC9细胞的培养基中持续加入，行3个月的培养后，再加入吉非替尼不再引起细胞死亡，获得耐药的细胞株（PC9-IR）。用同等浓度的吉非替层对敏感和耐药的细胞行72h处理，在5μmol·L-1下PC9-IR对吉非替尼仍敏感，而在吉非替尼浓度0.5μmol·L-1时，敏感PC9细胞生长。耐药细胞0.5μmol·L-1生长率为98%，敏感细胞为35%，差异有统计学意义（P0.05）。异鼠李素对PBMNCs细胞和PC9细胞增殖作用显示，100μmol·L-1浓度下第1d的生长率为39%，远低于5μmol·L-1第1d 86%的生长率，差异有统计学意义（P0.05）。于6个孔板中接种PC9-IR，每孔100个细胞，健康志愿者正常培养基，试验组异鼠李素40μmol·L-1，培养10d，共重复3次，可见异鼠李素明显PC9-IR细胞的克隆形成能力，（P0.05）。磷酸盐缓冲液悬浮的死亡细胞，持续培养至细胞无药物性死亡。细胞增殖情况，将细胞以每孔5×103孔板上，0.5μmol·L-1吉非替尼向普通PC9细胞的培养基中持续加入，行3个月的培养后，再加入吉非替尼不再引起细胞死亡，获得耐药的细胞株（PC9-IR）。用同等浓度的吉非替层对敏感和耐药的细胞行72h处理，在5μmol·L-1下PC9-IR对吉非替尼仍敏感，而在吉非替尼浓度0.5μmol·L-1时，敏感PC9细胞生长。耐药细胞0.5μmol·L-1生长率为98%，敏感细胞为35%，差异有统计学意义（P0.05）。异鼠李素对PBMNCs细胞和PC9细胞增殖作用显示，100μmol·L-1浓度下第1d的生长率为39%，远低于5μmol·L-1第1d 86%的生长率，差异有统计学意义（P0.05）。于6个孔板中接种PC9-IR，每孔100个细胞，健康志愿者正常培养基，试验组异鼠李素40μmol·L-1，培养10d，共重复3次，可见异鼠李素明显PC9-IR细胞的克隆形成能力，（P0.05）。见表1。 先制成耐吉非替尼人肺癌细胞株（PC9-IR），再异鼠李素处理结果显示，采用异鼠李素时PC9-IR细胞生长，异鼠李素故应用Western blot法检测，在药物浓度40μmol/L·L-1时，在PC9-IR细胞中AKt473位的磷酸化水平已被明显抑制，