兴安升麻总苷抗肿瘤药效研究论文.docVIP

　　兴安升麻总苷抗肿瘤药效研究论文 .freelL。小鼠口服升麻总苷100 mg/kg和200 mg/kg可明显抑制S180移植瘤(抑瘤率分别为42.8%和54.6%)和裸鼠移植人肺腺癌A549的生长(T/C值分别为58.1%和52.2%),肿瘤组织病理切片和流式细胞仪对A549肿瘤细胞凋亡的检测显示,升麻提取物可诱导体内肿瘤细胞凋亡。结论 升麻体内体外均具有抗肿瘤活性,其体内抑制肿瘤生长可能与诱导细胞凋亡相关。 【关键词】 升麻总苷；小鼠S180肉瘤；裸鼠；人肺腺癌A549；凋亡 Key icifuga dahurica；Sara 180 tumor cells；nude mice；human pulmonary carcinoma A549；apoptosis 目前,肿瘤的化学治疗已经取得很大进展,.freelicifuga foetida L.)、兴安升麻(C.dahurica Maxim.)和大三叶升麻(C．heracleifolia Kom.)的根茎。近年来对升麻药理活性的研究表明,升麻三萜类化合物体外具有明显的抗肿瘤细胞增殖作用2-4,口服升麻提取物可明显抑制小鼠肝癌H22的生长,升麻抗肿瘤活性与诱导肿瘤细胞凋亡相关5。为了进一步明确升麻的抗肿瘤活性,笔者采用兴安升麻总苷提取物对小鼠移植瘤及裸鼠体内移植人肿瘤细胞的影响进行观察,为升麻的应用奠定基础。 1 材料与方法 1.1 药物及试剂 兴安升麻总苷(TGCD)的制备：原材料于2004年9月采自内蒙古自治区喀喇沁旗茅荆坝,经鉴定为兴安升麻。将升麻地下部分粉碎过筛后,以10倍量的80%乙醇加热回流提取3次,每次1 h。提取完毕,过滤,滤液减压浓缩至波密度为1.12时加入吸附剂硅藻土进行柱层析。先以工业己烷洗去油脂,然后用乙酸乙酯洗脱,得到的乙酸乙酯部分经减压浓缩得总苷,收率为5%～6%,以27-脱氧升麻亭为对照品,比色法测定升麻总苷含量达60%。5-氟尿嘧啶(5-FU)为天津金耀氨基酸有限公司产品,批号0703021；环磷酰胺(CPX)为山西普德药业有限公司产品,批紫杉醇为北京四环医药科技股份有限公司产品,批号0612181。培养基RPMI-1640、DMEM、MTT为Gibco公司产品,胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司。 1.2 动物 ICR小鼠,雄性,18～22 g；BALB/c 品系裸鼠,雄性,16～18 g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证号SCXK (京)2007-0001。 1.3 细胞株 人肺腺癌细胞A549购自中国医学科学院肿瘤研究所,人食道癌细胞Eca-109购自中国科学院上海细胞中心,小鼠肉瘤S180购自北京大学医学部动物中心,人白血病细胞HL-60、人肝癌细胞HepG2、人乳腺癌细胞MDA-MB231均由常规液氮保存。 1.4 升麻总苷体外抑瘤活性的测定 参照文献6方法,收集生长良好的肿瘤细胞,用含10%小牛血清的RPMI- 1640或DMEM 培养基配成1×104/mL细胞悬液,接种于96孔板内,每孔100 μL,37 ℃、5%CO2孵箱培养24 h后,加入待测TGCD药液(药物终浓度10、20、40、80、100、200 μg/mL),每浓度设3个平行孔,实验设空白对照和阳性对照药孔。阳性对照药为5-FU(药物终浓度0.1、1、10 μg/mL)。培养4 d后弃上清,每孔加入MTT液10 μL(5 mg/mL,RPMI-1640培养基配制)后继续培养4 h,每孔加入100 μL酸化异丙醇细胞裂解液,过夜培养,用Bio-Tek MQX200型酶标仪在检测波长540 nm、参考波长450 nm下测吸光度(A)值,计算每个浓度抑制率和,用SPSS10.0统计软件计算出IC50值。 1.5 升麻总苷体内对小鼠S180移植性肿瘤的药效观察 取小鼠传代后第7～10日的肿瘤组织,研磨成细胞悬液,用无菌生理盐水稀释,细胞浓度为1×107/mL,于小鼠右前腋皮下接种,0.2 mL/只,接种全过程在无菌操作下完成。第2日分组给药,5组分别为模型对照组、阳性药对照组(腹腔注射CPX 30 mg/kg)及TGCD低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),阳性药对照组,每组10只。每天给药1次,共10 d。末次给药后24 h处死动物,称体重后完整剥离瘤块并称重,计算抑瘤率。 1.6 升麻总苷对裸鼠体内移植人肿瘤细胞的抑瘤作用 在超净台内无菌操作下取出在裸鼠体内生长良好的肿瘤结节,剪成1 mm3大小的小瘤块,采取套管针小块接种法,将瘤块埋植于BALB/c系裸鼠右腋窝皮下。待肿瘤长出并可触及时,将动物随机分为5组,每组6只,分别为模型对照组、阳性药对照组及TGCD低、中、高剂量组(50、