人类原钙粘蛋白基因簇调控元件的克隆及对其启动子活性的影响.PDFVIP

18 卷 2 期 生命科学研究 灾燥造援员8 晕燥援2 圆园14 年4 月 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻 砸藻泽藻葬则糟澡 Apr. 圆园14 人类原钙粘蛋白基因簇调控元件的克隆 及对其启动子活性的影响 海洋 郭 亚 李 伟 强* （上海交通大学 系统生物医学研究院，比较生物医学研究中心，中国上海 200240 ） 摘 要 人类原钙粘蛋白渊Protocadherin Pcdh 冤基因簇包含53 个成串排列非常相似的基因 组成3 个紧密相连 的基因簇渊 茁 和酌冤遥 原钙粘蛋白基因簇酌 通过启动子选择性表达产生神经元细胞膜表面的分子多样性 但 是 该多样性产生的分子机制还不清楚遥 调控元件HS7L 和HS5-1aL 作为候选的增强子可能具有调控Pcdh酌 基因表达的作用遥 利用分子克隆的方法 将调控元件HS7L 和HS5-1aL 分别克隆至包含酌a9尧酌a10尧酌b3尧酌b7 和 酌c 3 启动子的荧光素酶报告基因的下游遥 通过荧光素酶报告基因试验 测其对该5 种Pcdh酌 启动子活性的影 响 发现HS7L 对5 种启动子活性具有增强作用 HS5-1aL 对酌a10 启动子活性具有增强作用遥 之后 通过基因 沉默绝缘子CTCF 发现下调CTCF 不仅降低酌b 1 基因表达 而且能够显著降低酌b 1 启动子报告基因活性遥试验 结果表明调控元件HS7L 和HS5-1aL 能够增强Pcdh酌 启动子活性 推测可能通过CTCF 介导的增强子-启动子 相互作用调控Pcdh酌 的细胞特异性基因表达遥 关键词 原钙粘蛋白基因簇曰选择性表达曰绝缘子CTCF 曰增强子-启动子相互作用 中图分类号 Q71 文献标识码 A 文章编号 1007-7847 渊2014 冤02-0095-05 Cloning and Functional Analysis of the Regulatory Elements in the Human Protocadherin Gene Cluster WU Hai-yang, GUO Ya, LI Wei, WU Qiang* (Center f or Comp arative Biomedic ine, Institute of Systems Biomedicine, Shanghai Jiao Tong Unive rs ity, Shanghai 200240, China) Abstract ：Promoter choice of members of the protocadherin 酌 (Pcdh酌) gene cluster in single neurons may generate an enormous diversity on the cell surface of individual neurons in the brain, but the underlying molecular mechanisms are poorly understood. Here, candidate enhancer elements of the human Pcdh酌 clus原 ter, HS7L and HS5-1aL, were cloned into the downstream of the luciferase reporter gene which is under the control of the 酌a9, 酌a10, 酌b3, 酌b7, or 酌c 3 promoter. Luciferase reporter gene assay, which was used to char原 acterize the