鸡氨肽酶H在大肠杆菌中的表达、纯化及部分酶学性质分析.PDFVIP

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2017-06-14 发布于福建
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鸡氨肽酶H在大肠杆菌中的表达、纯化及部分酶学性质分析.PDF

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生物工程学报 Chin J Biotech 2008, March 25; 24(3): 381-386 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 H 1 1 1 1 2 1 赖庆安 , 刘树滔 , 卢菀华 , 陈莉 , Toshihide NISHIMURA , 饶平凡 1 , , 350001 2 Graduate School of Biosphere Science, Hiroshima University, Japan : 氨肽酶H(Aminopeptidase H, APH))是生物组织内一种常见的氨基内肽酶, 但因为天然材料中含量很低, 基本无法深入研究其催化机理、功能与结构的关系及其在生物体内的确切功能。从鸡肝组织克隆了APH 的全基因序列, 并把该序列亚克隆到载体pET22b(+)上, 然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3), 构建了APH 的表达菌株。该菌株经IPTG 诱导, 在 SDS上明显出现一条与天然APH 理论分子量一致的新增蛋白带, 该条带的浓度随着表达时间的延长逐渐加深; 6 h 基本达到平衡, 此时重组蛋白占总蛋白的 16.7%, 表达水平高达94.7 mg/L 。对表达产物进行了活性检测、纯化和酶学性质分析, 发现重组蛋白在亚基构成, 热稳定性, 最适pH 等方面与天然APH 基本相同, 据此可以确认表达产物确实是 APH, 发酵液总活力达到 1636 u/L。这些结果为APH 的催化机理及其在生物体内的功能的阐明奠定了重要的物质基础。 : 氨肽酶 H(APH), 表达, 纯化, 酶活 Expression in Escherichia coli, Purification and Enzymatic Properties of Chicken Aminopeptidase H 1 1 1 1 2 1 Qingan Lai , Shutao Liu , Wanhua Lu , Li Chen , Toshihide Nishimura , and Pingfan Rao 1 The Institute of Biotechnology in Fuzhou University, Fuzhou 350001, China 2 Graduate School of Biosphere Science, Hiroshima University, Japan Abstract: Aminopeptidase