快速提取烟草DNA的方法.pdf

维普资讯 第 29卷 第 3期 东 北 农 业 大 学 学 报 29 ()：275—278 199B年 9 月 JoumldofNorthelutAgriculluralUnivecr~ly September I9g8 快速提取烟草 DNA的方法 摘 要 利用快速、简易．适于烟草的DNA提取方法．可以薮得较纯净、高产率，大分子量 的 DNA 以满足植物分子育种的要求． 关 键 词 韭旦l 堕旦 △，丝壁，缝廑，毽丝盐王直挫 中图分类号 S572uj 类等物质含量较高 ，给 DNA的分离和 0 前 言 纯化工作带来了干扰和困难。为此，我们参 照 Bendick” 、Murray “等人的方法， 外源DNA直接导人技术在多种作物上 通过改进，获得较为满意的结果．采，玎该法 的应用，要求必须有高纯度和片段大小适宜 所得DNA样品已在外源DNA直接导人烤 的植物 DNA “．如何从供体材料中快速 烟抗赤星病．花叶病等方面得到应用．并获 获得高分子量 (SOKb)．纯净的DNA已成 得三棵变异烤烟植株．本方法主要特点是简 为开展此项研究中最基本的，也是非常重要 单、经济．DNA提取率较高，该程序可在 的一个步骤。 一 般实验室条件下进行．现报道如下。 有关一些高等植物DNA分离、纯化的 简单可行的方法国内外已有报道，但 口前还 1 材料与方法 尚无统一的标准方法。常规的DNA提取方 法需要如液氮冷冻．低温操作、CsC1，密度 1．1 供试材料 掷度超速离心等先进仪器设备和 良好的试验 烤烟、香料烟等 10份材料，均 由东北 条件 ，而这些条件正是一般 实驼 室进行 农业大学农学院婀草教研室提供。 DNA提取的制约条件。并且 由于植物种类 1．2 提取方法 繁多，其中某些植物 其特殊性，仅用一般 1．2．1 试剂和溶液 分离，纯化植物DNA的方法来处理这些材 提取缓 冲液 ：0．45oto]·L 氯 化 钠 、 料，其结果往往是不兮人满意。烟草这类植 0．45mo]·L。。柠 檬酸三钠 ，01oto]·L 物就是如此。 四乙酸乙二胺 (EDTA)，1％十二烷基硫酸 烟草 中蛋白质、糖类、色素．烟碱及酚 钠 (SDs)，pH缸至 7．0。 收穑 J【期：1997—O9 5 10×SSC缓冲液 ：1．5mo]-L。。氯 化 维普资讯 东 北 农 业 大 学 学 报 第 29眷 钠，0．15mol·L-柠檬酸三钠．pH7．0。 酸． 1×SSC缓冲液：以 10×SSC缓冲液稀释 (8)将沉淀溶解于 l0～20mL、0．1× 10倍．调pH值至7．0． SSC缓冲液中，待完全溶解后 ，再加入 0．1×SSC缓冲液：以 l×SSC缓冲液稀释 1／1O体积的 10×SSC缓冲液，使其最终 10倍．调pH值至7．0． 浓度 为 l×SSC缓冲液 (此时得 到的是 氲仿一异戊醇混台液：氯仿 ：异戊 醇 = DNA粗制品)． 24：Kv／v1． (9)加入 RNase．使酶最终浓度达到