高质量浓度肿瘤坏死因子α对骨髓间充质干细胞的损伤作用剖析.doc

高质量浓度肿瘤坏死因子α对骨髓间充质干细胞的损伤作用 李洁媚，王槐高，邓达师，卢 芳，张琛琛，刘国增，周艳芳(广东医科大学病理生理学教研室，广东省东莞市 523808) 引用本文：李洁媚，王槐高，邓达师，卢芳，张琛琛，刘国增，周艳芳. 高质量浓度肿瘤坏死因子α对骨髓间充质干细胞的损伤作用[J].中国组织工程研究，2016，20(36):5325-5331. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.36.001 ORCID: 0000-0002-8477-6564(周艳芳) 文章快速阅读： 文题释义： 原代培养：指直接从机体取细胞、组织和器官后立即进行培养，较为严格说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际操作上通常把第1 代至第10代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。 肿瘤坏死因子α：可参与脑缺血后的损伤修复过程，调节脑缺血后血管发生和神经发生，在脑组织损伤恢复及神经保护方面具有重要意义。肿瘤坏死因子α对细胞的保护效应非常复杂，与其处理浓度、时间、实验模型、实验方法以及细胞来源息息相关。 α对骨髓间充质干细胞的损伤作用及可能机制。 方法：原代培养SD大鼠骨髓间充质干细胞，高质量浓度肿瘤坏死因子α(200 μg/L)处理6 h，MTT比色法检测细胞存活率，Hoechst33342染色观测细胞凋亡，Annexin-V/PI双染检测细胞凋亡率，丙二醛、超氧化物歧化酶试剂盒检测细胞氧化应激水平，Western blot法检测Akt、p-Akt、FoxO1及p-FoxO1蛋白表达改变。 结果与结论：①相比对照组，高质量浓度肿瘤坏死因子α处理6 h后，骨髓间充质干细胞存活率下降，凋亡率上升；②肿瘤坏死因子α作用后，G1期和G2期细胞比例降低，S期细胞比例增高，氧化应激水平增高，p-Akt、p-FoxO1蛋白表达降低，差异有显著性意义(P 0.05)；③结果提示，高质量浓度肿瘤坏死因子α可诱导骨髓间充质干细胞周期阻滞，诱导凋亡，提高其氧化应激水平，其损伤机制可能与抑制Akt-FoxO1信号通路有关。 关键词： 干细胞；骨髓干细胞；肿瘤坏死因子α；骨髓间充质干细胞；Akt；FoxO1；凋亡 主题词： 肿瘤坏死因子α；骨髓；间质干细胞；细胞凋亡；组织工程 基金资助： Tumor necrosis factor alpha-induced apoptosis in bone marrow mesenchymal stem cells Li Jie-mei, Wang Huai-gao, Deng Da-shi, Lu Fang, Zhang Chen-chen, Liu Guo-zeng, Zhou Yan-fang (Department of Pathophysiology, Guangdong Medical University, Dongguan 525808, Guangdong Province, China) Abstract BACKGROUND: Stem cell transplantation has achieved good results in the treatment of cerebral ischemia, and how to reduce apoptosis of transplanted cells has become the focus of the therapy. OBJECTIVE: To investigate the injured effect of tumor necrosis factor alpha (TNF-α) on bone marrow mesenchymal stem cells and its mechanism. METHODS: Primary cultured bone marrow mesenchymal stem cells from Sprague-Dawley rats were treated with 200 μg/L TNF-α for 6 hours. Cell vitality was assayed by MTT, and cell apoptosis was observed by Hoechst33342 staining. Apoptotic rate was detected by Annexin-V/PI double staining. Level of oxidative stress was evaluated by determination of malondialdehyde and superoxide