第十三章 免疫毒理学17，18.pptVIP

* 第三节 免疫毒性作用的试验方法与评价 * 一、检测方法 （一）免疫病理学检查 （二）免疫功能检测 （三）超敏反应和自身免疫反应 （四）免疫细胞因子的检测 * （一） 免疫病理学检查 观察免疫器官大小、重量和大体形态； 观察胸腺、脾脏、淋巴结和骨髓的组织结构和细胞类型； 检查局部黏膜相关淋巴组织（包括肠、皮肤、鼻、支气管等黏膜相关淋巴组织） 利用荧光标记单克隆抗体和流式细胞仪观察淋巴细胞表面标记检查淋巴细胞表型 用常规染色和免疫组化观察组织结构 * FIG. 2. (A) Low magnification of a normal thymus from a control rat exhibiting a cortex: medulla ratio of approximately 2:1 (×40). (B) High magnification of a normal thymus cortex from the same rat in (A) (×400). The arrow indicates an apoptotic body. (C and D) Thymus from a rat treated with 5 mg PFNA/kg/day (C) The thymus shows a cortex: medulla ratio of approximately 1:1 (×40). (D) Increased numbers of apoptotic lymphocytes and tingible body macrophages with intra cytoplasmic apoptotic bodies (arrows) are evident in this thymus (×100). （二）免疫功能的测定 免疫功能检测 获得性免疫应答 固有性免疫应答 细胞免疫功能检测 体液免疫功能检测 巨噬细胞功能检测 NK细胞活性测定 宿主抵抗力试验 ELISA 免疫电泳法 血凝法 空斑形成细胞 细胞毒性T细胞杀伤试验 T淋巴细胞增值试验 迟发型超敏反应 NK细胞对敏感肿瘤细胞的溶解作用 放射性核素铬标记的鸡红细胞吞噬法 宿主抵抗力试验模型 * NK细胞活性测定 主要观察NK细胞对敏感的肿瘤细胞的溶解作用。将接触和未接触外源化学物的动物脾淋巴结与同位素 （51Cr） 标记的靶细胞共同孵育，NK细胞溶解肿瘤靶细胞，将同位素释放至培养液。培养结束后离心分离上清液，用γ计数仪测定同位素强度，51Cr的放射性脉冲与NK细胞活性成正比可反应NK细胞活性。 NK cell target cell 51Cr 自然杀伤组 自然释放组 最大释放组 NK活性（自然杀伤率%） ＝（试验组cpm-自然释放组cpm）/（最大释放组cpm-自然释放组cpm）×100% * 巨噬细胞功能检测 放射性核素铬标记的鸡红细胞吞噬法。从小鼠腹腔收集巨噬细胞，在24孔板贴壁生长，加51Cr-cRBCs孵育后，弃去上清中的51Cr-cRBCs，再氯化铵短暂培养，去除与巨噬细胞结合但未被吞噬的51Cr-cRBCs。最后用NaOH溶解巨噬细胞，测定溶解液中的放射 强度。 * 体液免疫功能检测 一般用特意性抗原免疫动物，刺激脾B细胞 活化并分泌抗体，然后观察抗体生成量或抗 体形成细胞数。前者用ELISA 、免疫电泳法、 血凝法等直接测定血清抗体浓度，后者常用 空斑形成细胞试验。 * 细胞免疫功能检测 最常用的方法是细胞毒性T细胞杀伤试验（CTL）、T淋巴细胞增殖试验和迟发型超敏反应。 CTL试验评价脾T-淋巴细胞识别和溶解经抗原处理靶细胞的能力。 淋巴细胞增殖功能一般选用不同有丝分裂原刺激体外培养的淋巴细胞，然后观察淋巴细胞增殖情况。 DHT试验先用某种抗原致敏，再用相同抗原作皮肤试验，观察局部以出现红肿为特征的迟发型超敏反应。 * 一般用被动皮肤过敏试验（PCA）、主动皮肤过敏试验（ACA）、全身主动皮肤过敏试验（ASA）检测Ⅰ型超敏反应，多用于检测蛋白或多肽的致敏性。抗体滴度检测。 目前没有预测药物II型和III型超敏反应的标准实验方法。 检测Ⅳ型超敏反应最常用的是局部封闭涂皮试验（Ｂuecher test, BA)、豚鼠最大值试验（GPMT)和豚鼠迟发性皮肤超敏反应（DHR）。 目前还没有检测药物自身免疫反应的标准方法。鼠局部淋巴结试验（LLNA）可以用于自身免疫反应。 免疫原性比较困难。人与动物区别；药物的生物学特征很容易改变。 假过敏或者类过敏反应。 不良免疫刺激，与假过敏之间有交叉。 （三）超敏反应和自身免疫反应 * （四）免疫细胞因子的检测 检测方法主要有：生物学测定、免疫学测定、分子