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优化逆转录病毒载体转导T 细胞受体基因 牟艳芳，张巨峰，张文峰，邵红伟，黄树林 广东药学院广东药学院生命科学与生物制药学院，广州 (510006) E-mail: myf831208@163.com 摘 要: 逆转录病毒载体转导 T 细胞受体（TCR ）基因进T 淋巴细胞，可以潜在的影响 T 细胞识别抗原的能力为有效的特异性免疫治疗开辟新的途径。提高转录病毒载体转导 TCR 基因的转染效率和表达水平为以后临床应用有深远影响。本文从 TCR 基因和逆转录病毒载 体两个方面，不同的方法进行综述。 关键词：T 细胞受体；逆转录病毒载体；基因转导 抗原特异性 T 细胞的过继性转导在治疗肿瘤和病毒性疾病方面很有前景。[1-2]T 细胞 受体（TCR ）基因转导进 T 淋巴细胞可以潜在的影响 T 细胞识别抗原的能力，转导高活性 的 TCR 基因可以成功地将肿瘤的特异性转导到非肿瘤活性的淋巴细胞。T 细胞的特异性主 要由 TCR 决定的，TCR 基因转导可以为肿瘤特异性 T 细胞的转导提供另一条途径。目前在 [3]逆转录病毒介导基因的高表达对于 TCR 基因转导过程中最常用的是逆转录病毒作为载体。 基因治疗来说是非常关键的特别是当生物效能的发挥主要依赖于转导基因的表达量，因此提 高转导 T 细胞受体基因的转然效率和表达水平对于疾病的治疗及以后临床上的应用都是非 常重要的。 1 TCR 基因 TCR是T细胞表面识别抗原的分子，现已知道参与TCR组成的共有4条肽链即α、β、γ和δ。 人类外周血95%T 细胞表达α/βTCR, 3%～ 5%T 细胞表达γ/δTCR [4 ] 。TCR 的V 区同免疫球 蛋白V 区有类似的结构特点: α、β链的可变区各有3个高变区,又称互补决定区(complementary determining region ,CDR) ,即CDR1、CDR2 和CDR3 。TCR 与MHC-多肽分子结合形成 TCR-MHC 多肽复合物, 其中CDR1、CDR2 主要与MHC 分子相结合,CDR3 直接与抗原肽 结合[5 ] 。由于CDR3在T 细胞成熟过程中基因重排, 从而产生了TCR 的多样性, 为T细胞三 [6 ] 分子复合物识别不同的特异性抗原奠定了分子基础 。 逆转录病毒是第一个被允许用于用于临床的载体 [7] ，也是广泛用于实验室研究和 [8] 将特异性TCR基因与其重组,经包装细胞包装后,形成具备感染能力的新 临床试验的载体。 病毒颗粒，理论上它能转染几乎100 %的靶细胞,且能整合到基因组中获得稳定而长期的表达, 但实际的转染效率远低于此,转染人外周血分离的CD4+ 和CD8+ T 的效率只有6%-9%[9] 。 要提高TCR基因的转染效率和表达水平可以从三方面进行，改善TCR基因水平修饰 及逆转录病毒载体方面和转染方法。 2 TCR基因方面 2.1 密码修饰基因 近年来,有些国外学者通过优化修饰基因密码来加强抗原基因在特定细胞中的表达。 此类研究在HIV 、HPV 等病毒DNA 疫苗的研究中取得可喜进展[10 ,11],在鼠体内试验，通过 密码修饰病毒蛋白的DNA疫苗，CTL应答和抗肿瘤活性也显著提高[12] 。 + Scholten 等通过密码修饰人TCR 的α，β基因，然后通过逆转录病毒LZRS转导进CD8 T 细胞。通过密码修饰的TCR 的α，β基因与野生型的T CR 的α，β基因在CD8+ T细胞中的表达