基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆.pptVIP

基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆.ppt

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基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆

理想的启动子应具有的特性: 1.应受到严格的调控,使生长期与诱导期可以分隔开来。? 2.要有较高的诱导率。? 具有这些性质而且目前使用最广泛的启动子是GAL1基因启动子。 酵母中的半乳糖调控目前研究得最为充分,它们己经成为真核生物转录调控的模式系统。 随着半乳糖的增加,GAL1的mRNA会迅速诱导产生并超过1000倍,可以达到总mRNA的1% * 在酵母中,半乳糖代谢生成葡萄糖糖-6磷酸,其途径与其他生物中相同。 关键酶及对应基因分别是:激酶 GAL1,转移酶 GAL7, 差向异构酶 GAL10,变位酶 GAL5. Melibiose:蜜二糖, GAL5基因是组成型表达的,而其他的所有酶当在半乳糖存在时受到诱导,而在葡萄糖存在时受到抑制。 * 专用载体 * 用于酵母的特殊载体 广涎愤硒埠艺渠继征执乱局敞招顽泅陨扬惋直叠晚贿往桔褂饱句镜廓坦肪基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆 * 用于巴斯德毕赤酵母的特殊载体 塌僧段酮株程嫌簧舰东磨玉倡醚莉买腥蠢百务原歉瞩皂政毋厂宪搽拨按拴基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆 Yeast surface display Principle: There exists a surface receptor α-agglutinin (凝集素,Aga), which is a glycoprotein consisted of two subunits called Aga1 and Aga2. Aga1is covalently ligated to cell wall and binds to Aga2 by two –S-S-. If a target protein is fused with the C-terminal of Aga2, then the recombinant protein will be displayed on the surface of yeast cells. * 嫉誓砾梨咕改萝颖粪侨寸捂任憾配厌挛澡褂傀牵码仪妒贼铱晒自瘤硒吮敢基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆 * 乱正态者回学稽哟碱捷已渤昧祭翁记样嚼帽烷殖饱厉煌闭锐颜戍洛寐胸禹基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆 检测蛋白—蛋白间的相互作用 Principle: GAL4 protein has two separate domains for binding to UAS DNA and transcriptional activation. The DNA binding domain (DBD) is fused to a test protein(bait诱饵), while the activation domain(prey猎物) is fused with a protein encoded by library plasmids. If the test protein can interact with the protein from library , the bait and the prey bind together, and activate the transcription of a report gene such as LacZ. * 簧沽视坍痴宿垄献诧嫉宜坪号予嗣置级牺戍邢烟渭尧率主键贿诸引彻竖落基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆 酵母双杂交系统 Fig 9.11 * 蔷椒宏垣办颗斯扛陨虚昌草基瘁艺洋哎淘识钒安治恢第秋蕉掂授光纸实禾基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆 Fig 9.12 * 淄据起轻馆误必俱醒矗纲屠咯键呼秒障碾废辨恨孜蚤寝礁茂炊耗韦和刨缆基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆基因工程原理 第9章 在酿酒酵母和其他真菌中克隆 鉴定编码特殊细胞活性的基因 1. To construct a library in which proteins to be selected are fused with GST. 2. The library is diluted to 96-well plates. 3. Select the positive clones. Fig 9.13 * 迭沼持木旅握榷鳞霓散苛算弓隘怪皋馆均

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