FCM基础知识.pdfVIP

FCM基础知识 安徽省立医院中心实验室 张爱梅 FCM 的基本原理 FCM 的影响因素 FCM 的特点 FCM 的专用名词 FCM在血液疾病诊断中的应用 一、FCM 的基本原理 Injector Tip Sheath fluid Fluorescence signals Focused laser beam FSC (forward scatter) ：前向散射光 与细胞大小、表面积相关 SSC （side scatter ）：侧向散射光 反应细胞的颗粒性、结构复杂性 抗原抗体反应 FSC小 SSC小 FSC 中等， SSC大 FSC大 SSC大 二、FCM 的影响因素 仪器方面的因素 试剂方面的因素 人员方面的因素 FCM 的基本操作步骤 细胞 裂红 孵育 洗涤 上机 分析 计数 A g - A 胞浆或胞核内抗原检测时，还需经过固定膜抗 b 应 反 原、透膜细胞处理，再标记浆内或核内抗原 仪器方面的因素 激光能量减低、光纤损坏、进样管堵塞、 流动室脏等因素都可导致荧光信号减弱， 造成假阴性 试剂方面的因素 抗体选择不合理 荧光素搭配不合理 人员方面的因素 操作人员：抗体漏加、错加， 经验不足：透膜时间不够、 不会补偿 获取细胞数不够 分析人员：不细心，经验不足 形态报告：AML-M5 FCM报告：AML （不表达cCD79a) 化疗一个月，未缓解 化疗2个月，仍未缓解 重新分析MRD：APC的CD分子写错 三、FCM的特点 抗体多、特异性好定性准确（明确系别、 阶段和良恶性） 快速获取大量细胞，使用目的抗原设门 -擅长检测比例低（0.01%）、数量少、多种 肿瘤细胞并存的情况 标本类型多样:血液、骨髓、胸水、腹水、 脑脊液、组织穿刺物、淋巴结 四、FCM 的专用名词 1.几色流式 2.设门 3.反向设门 1.几色流式？ 所谓的“色”是指荧光素，由机器荧光通道决 定 的，例如：同样是配置2根激光管（488nm和 633nm ），BD 的calibur只能做4色，即FITC、 PE、PerCP和APC ，而BD标配的Canto II则可做 6色，除上述四色外，还有Pe-Cy7和APC-Cy7 四色流式 八色流式 2.设门 “设门”是伴随数据的图形化分析产生的，是指 在细胞分布图中指定一个范围或一片区域，对其 中的细胞进行单参数或多参数分析。 “门”的形状：线性门、矩形门、任意门、圆 形门、多边形门、四象限门。 任意门 十字门（四象限门） 矩形门 FCM分析图形 单参数分析图形：即直方图 多参数分析