7-第十二章 色谱柱的使用及保养.pdfVIP

第十二章 色谱柱的使用及保养 主要内容： 良好的色谱实验习惯 色谱柱的使用及操作 色谱柱的保养 样品方面 流动相方面 在线的保护装置 保护柱 色谱柱的清洗 色谱柱的存放 色谱柱常见毛病问题 良好的色谱实验习惯 • 拿到一根新色谱柱时，先测柱效 • 保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录 条件 • 定期检测柱效 • 定期检测仪器的谱带展宽 色谱柱的使用及操作 • 流动相的转换 – 特别是GPC柱 • 流速(压力)的变化幅度 • 温度的变化幅度 • 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求 色谱柱的保养（一） • 样品方面 – 除去微粒及杂质 – 了解样品在流动相中的溶解度 如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解 度，防止其在流动相中析出 – 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用 色谱柱的保养（二） • 流动相方面 – 除去微粒 – 纯度的要求 • 超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低 • 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 • 缓冲液（盐）的浓度 • 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 • 溶剂中的杂质含量 – 流动相对样品的溶解度 • 有机溶剂或水的比例 色谱柱的保养（三）-在线的保护装置 • 给色谱柱提供物理的保护 – 除去样品及流动相中的颗粒 • 给色谱柱提供化学的保护 – 防止分析柱被化学污染 • 装置 – 在线过滤器 – 自装填料保护柱 – 预装保护柱 色谱柱的保养（四）-保护柱 • 可避免化学污染。多数保护柱影响到整个色谱柱的柱效， 特别是在用微柱时 – Guard-Pak预装保护柱 • 有各种填料的预装柱供选择，使用方便。填料容积 较小，也引起柱效降低 色谱柱的保养（五）-色谱柱的清洗 • 对所做的样品要有充分的了解 用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗 • 硅胶柱的一般方法 先用甲醇洗去极性杂质 用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200ml依次活化 • 键合相柱(烷基)的一般方法 20倍柱体积的：甲醇-二氯甲烷- 甲醇-水依次冲洗 色谱柱的保养（六）-色谱柱的存放 • 存放前的处理 – 除去杂质、盐 • 合适的存放溶剂 • 避免色谱柱床的干枯 • 避免机械震动 • 防止细菌生长 • 注意存放的温度 色谱柱常见毛病 • 柱压过高 – 多少才算高? 不同色谱柱有差异 不同系统有差异 不同溶剂有差异 • 柱效低 • 重复性差 • 不出峰，回收率低 色谱柱常见毛病-柱压过高 • 为什么柱压会过高 – 微粒堵塞 样品 流动相 密封垫 – 柱床膨胀 – 不可逆吸附 – 细菌生长 色谱柱常见毛病-柱效低 • 为什么柱效低 – 色谱柱被污染 – 过滤片部分堵塞 样品、流动相或密