实验4肝糖原的提取、鉴定与定量.pptVIP

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2017-05-31 发布于上海
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实验4肝糖原的提取、鉴定与定量.ppt

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实验4肝糖原的提取、鉴定与定量ppt课件

肝糖原的提取、鉴定与定量;实验目的;实验原理;实验原理;（三）肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在620nm处有最大吸收。糖含量在(10~100)mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。; 实验材料; 实验材料; 实验材料;操作步骤;操作步骤;注意事项 1 肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的95％乙醇后，务必注意混匀。由于上清液为水溶液，比重大于95％乙醇，溶液分成两层。加之上清液已4mL多，加上等??乙醇，总量接近9mL，混匀操作比较困难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。 2 糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有关。葡萄糖残基在20个以下的会使碘呈现红色，20?30个之间使碘呈现紫色，60个以上的会使碘呈现蓝色。淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在20个以下（通常8?12个葡萄糖残基），吸附碘后呈现红棕色。 3 糖原水解液中葡萄糖的鉴定一步，加班氏试剂不能过量，否则反应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。;（二）肝糖原定量测定 ;操作步骤