壳聚糖纳米化的结核杆菌ESAT__省略_生Th1与Th2型细胞因子的影响_卢燕来.pdfVIP

南京医科大学学报（ 自然科学版） 第 卷第 期 34 5 · · （ ） 年 月 580 ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS NANJING Natural Science 2014 5 壳聚糖纳米化的结核杆菌ESAT-6 和FL 重组DNA 疫苗对小鼠产生 Th1 和Th2 型细胞因子的影响 卢燕来 ，冯旰珠 ，蒋青桃 ，邱 文 ，赵 聃 ，张 婧 ，王迎伟 * （南京医科大学微生物与免疫学系，江苏 南京 210029 ） ［摘 要］ 目的：探讨壳聚糖纳米包被的结核杆菌早期分泌性抗原（ kd early secretory antigenic target ， ） 与 样酪氨 6 ESAT-6 fms 酸激酶 配体 （ ， ） 重组 疫苗接种 小鼠对其 和 型细胞因子生成的影 3 fms-like tyrosine kinase 3 ligand FL DNA C57BL／ 6 Th1 Th2 响。 方法：制备壳聚糖（ ， ）纳米颗粒，然后用 纳米粒包被本室构建的结核杆菌 与 重组质粒（ nano-chitosan CS CS ESAT-6 FL nano- ESAT-6-FL ）、ESAT-6 质粒（nano-ESAT-6 ）、FL 质粒 （nano-FL ）和pIRES 载体（nano-pIRES ） ，并进行电镜和Western blot 鉴定。 此 后将上述质粒分别接种小鼠，同时给小鼠接种未用壳聚糖纳米颗粒包被的上述对应质粒，并设PBS 、CS 纳米粒及 BCG 作为对 照。 接种后 周，取小鼠脾细胞进行培养，并用结核菌纯化蛋白衍生物 （ ， ） 给予刺激 9 purified protein derivatives tuberculin PPD 72 h ，然后用ELISA 试剂盒检查小鼠脾细胞上清液中的Th1 型细胞因子（IFN-γ 、IL-12 ）和Th2 型细胞因子（IL-4 、IL-10 ）的分泌 水平。 结果：成功制备出壳聚糖纳米包被的结核杆菌 和 重组质粒（包括其他几种质粒），并证实被壳聚糖纳米包被的 ESAT-6 FL 质粒可在真核细胞中表达。 用壳聚糖纳米包被的ESAT-6-FL 重组质粒免疫小鼠，其脾细胞上清液中的IFN-γ 和IL-12 水平显著 高于未用壳聚糖纳米包被的相应质粒免疫组和其他对照组， 而IL-4 和IL-10