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PAGE胶蛋白微量回收试剂盒使用说明 货号：G7200 规格：20 Assays 保存：所有试剂常温下运输，收到后所有试剂2-8℃保存，溶液B避免火源，溶液A 在 低温下容易形成沉淀，请在使用前30℃加热，以促进溶解。 产品组成： 产品名称 规格 BufferA 10ml Buffer B 60ml 干粉 9.6g DTT 40mg 使用前将干粉和DTT 完全溶解于溶液A中，配完后4℃保存，每次使用时30℃加热，以促 进溶解，混合好的溶液A尽量在一个月内使用完毕。 产品说明： SDS不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具 之一，随着蛋白质技术的微量化，有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、 氨基酸组分分析或末端序列测定等，本产品就是专门为此用途开发的微量蛋白胶回收法，本 产品适用于从考染，铜染或锌染中回收蛋白质，回收效率在50-80%，能够使用20次。 产品特点： 1. 简单，不需要复杂而昂贵的仪器 （如电洗脱仪）。 2. 适用于变性胶 （SDS）和非变性胶 （Native）。 3. 回收率一般在50-80%之间 （跟蛋白质大小，洗脱时间相关）。 4. 跟后续的实验兼容，包括1-D、2-D 电泳和质谱测序等。 操作步骤： 1. 用手术刀片将铜染或锌染的胶块中含有目的条带的部分胶切下，放入1.5mL的 离心管中，用相应的消除液将胶中蛋白质条带脱色到胶体接近无色，室温12000 rpm （12830 g），离心5 min，尽量去除上清，保留胶体。 对于考染或其他考染方法，直接将不需要脱色液脱色的或经过脱色液脱色的胶块中含有 目的条带部分切下，放入1.5mL 的离心管中，用双蒸水洗两次，每次5min，再进行步骤2。 2. 用研磨杆将离心管中的胶体研磨成细小的碎片，加入400μL的溶液A，在室温 条件下，脱色摇床上震荡过夜 （16-18 小时），期间取出，偶尔震荡几次。 3. 室温12000 rpm，离心15min，转移上清到另外一个2mL的离心管中，加入2mL 的预冷的溶液B，混匀，4℃放置30 min。 4. 室温12000rpm，离心15min，去除上清，再将离心管放置在通风厨中，待残 留的液体挥发干净。 也可以再次加入0.5 mL 的溶液B，震荡洗涤沉淀，4℃放置 15 min，再重复步骤4 一 到两次，这样得到的蛋白质更纯净。 5. 选用合适的缓冲液溶解沉淀的蛋白质，以方便进行后续的电泳和质谱测序等实 验。 注意事项： 1. 在保证完全切取到目的蛋白质后，尽量去除多余的胶片。 2. 如果蛋白质的分子量较大，所加样的量较多，胶浓度比较大，可以适当延长温 育时间。 3. 为了有比较好的回收效果，在进行胶中蛋白质回收时，每个点样孔中所加的蛋 白质量最好在2μg-40μg 之间。 4. 采用含有Urea、Thiourea、SB3-10 等强溶解能力试剂的溶解液有助于沉淀蛋 白的完全溶解。 5. 研磨杆研磨碎片时，越充分越好，这样有利于蛋白质扩散到溶液A 中。 6. 采用此试剂盒进行胶回收时，一般不建议采用银染，因为此时回收效率较低。 7. 目的蛋白回收效率与蛋白的分子量大小有一定的关系，在10KD 以下的多肽回 收效率明显降低，如果大于120KD，则需要增加步