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利用转座质粒构建荧光标记的脱色希瓦氏菌（）！
· · 微 生 物 学 通 报 年 （） !!% ’$$% # = 利用转座质粒!#$!%$% 构建荧光标记的脱色希瓦氏菌’() ! ， ! ! ! ! ! ! !! 李光飞 邓代永 许枚英 岑英华 孙国萍 ! （中国科学院武汉病毒研究所 武汉 #$$%!） ’ （广东省微生物研究所菌种保藏与应用重点实验室 广州 !$$%!） 摘要：采用分子生物学手段将具有转座功能的自杀性质粒()*+,-.,/0 与荧光蛋白基因 !#$ 构建重组质粒 ()1. ,/0。()1.,/0 通过结合转移进入脱色希瓦氏菌2!’ 中，质粒上的转座子元件转座到2!’ 的染色体上，而质粒本身 的窄宿主复制位点使其在2!’ 中不能得到有效的复制而“自杀”。荧光显微镜下筛选表达荧光蛋白的脱色希瓦氏 菌克隆，通过对其提取质粒确定()1.,/0 已经在脱色希瓦氏菌中自杀。筛选得到生长速度未发生延迟、脱色能力 不受影响的荧光标记菌株 。标记的脱色希瓦氏菌在无抗生素压力的情况下培养，传代 次（ 次）后在荧 2!’.$ ’$ 345 光显微镜下依然查看到荧光蛋白的表达。该菌株的构建为研究其生态学行为奠定了基础。 关键词：荧光蛋白，脱色希瓦氏菌 ， 2!’ 6789(,9,* 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） :;# $’#.’= ’$$% $=.!!%.$ *%$+,-.+/% %0 1-%,2$.2+ 3#4225 !#$%#’’% (#)*’*+%,-*-. ’() 6$/7 8#$!%$% ! ， ? @A8*B.CDE! ! F1G@ F8E.H,*B! IJ +DE.HE*B! K1G HE*B.LA8! 2JG @A,.6E*B! !! ! （ ， ， ） （ ， %’() *)+,-,,! .# /-0.1.2 345 %’() #$$%! 6()27.)2 *)+,-,,! .# 8-90.:-.1.2 6()27.)2 ;0.-)9-(1 =! (:.0(,.0 .#
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