微生物学 实验6 微生物培养基的配制和灭菌.pptVIP

实 验 六 培养基的制备和灭菌 一、实 验 目 的 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 二.实 验 原 理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。不同微生物对营养物质的要求各不相同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 实验室的常用培养基： 细菌： 牛肉膏蛋白胨培养基； 放线菌：高氏1号合成培养基； 酵母菌：麦芽汁培养基； 霉菌： 查氏合成培养基； 高压蒸汽灭菌 一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽孢有较强的抗性，开水煮沸10分钟，甚至l～2小时，也不能完全杀死。因此，有效的彻底的灭菌则需要更高的温度，并要求能在较短的时间内达到灭菌的目的而不破坏营养。高压蒸汽霉菌利用高温湿热空气使菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 三. 实验材料 1、牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g、蛋白胨5g、NaCl 5g、琼脂粉20g、水1000ml，调节pH7.2～7.4。 (每个班配制1600ml) 2、300ml三角瓶、量筒、烧杯、电子天平、灭菌锅、15 mL离心管 原料（天然原料或药品）称量 混合溶解（加热沸腾） 过滤 分装容器 调整PH 备用 定容 消毒或灭菌 保温实验 四、实验步骤 1.称量①按照培养基配方，准确称量牛肉膏、蛋白胨、NaCl放于加入烧杯中。对于不是粉状（如肉膏）的药品，应用烧杯称量。 ②按照培养基配方，准确称量4g琼脂粉放于300ml三角瓶中。 2.溶解向烧杯中加入500mL热水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）；然后补加500mL蒸馏水，搅拌混匀。 3.调节pH值 培养基溶解均匀并冷却至室温，先用pH试纸检测初始培养基的pH值，然后根据要求加酸或碱（一般用1M HCl和1M NaOH），要缓慢少量多加搅拌，直至调到所需pH值。然后用蒸馏水定容。 （在合成培养基中，组成成分中含有磷酸盐者一般都已设计好pH值，故不需再专门调pH值。）  4.分装用量筒量取适量的培养基分装入三角瓶或试管内，管（瓶）口塞上乳胶塞，并用牛皮纸或报纸包上。 注：分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。300ml三角瓶：牛肉膏蛋白胨培养基200ml/瓶。 制备无菌水 无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。 1. 300mL三角烧瓶（装有5颗璃珠），装蒸馏水90mL。（8瓶/班） 2. 15 mL离心管，装蒸馏水9 mL（每班80管） 5.灭菌 一般培养基: 1.05 kg/cm2, 121℃, 20 min 含糖培养基: 0.703 kg/cm2,115℃, 30 min 高压蒸汽灭菌操作过程： 设置参数?加水?装锅?加盖?开电源?升温?拍冷空气（压力升为0.5 Pa时）?升温?保压灭菌?排气脱压至零（待温度降至100℃以下，打开排气阀排气）?开盖（待压力降至0时开盖）?取出灭菌物品?趁热摆斜面?保温检验灭菌效果。 灭菌器内冷空气的排除完全与否极为重要，因为空气的膨胀压力大于水蒸汽的膨胀压，所以当水蒸汽中含有空气时，压力表所表示的压力是水蒸汽压力和部分空气压力的总和，不是水蒸汽的实际压力；并且因为在同一压力下，含空气的蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度，所以，如果冷空气未排净会导致实际灭菌温度低于理论温度，从而灭菌不彻底。 搁置斜面 当培养基冷却至50℃左右时，将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基形成的斜面的长度不超过试管总长的一半。 思考题 1.培养基的种类有哪些，举例说明。 2.培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌的培养基如何进行无菌检查?