食品安全及其检测技术.doc

深圳大学研究生课程论文 题目免疫技术在乳制品质量安全检测中的应用 成绩 专业 生物医学工程 课程名称、代码 ?食品安全及其检测技术 年级 2016 姓名 李金方 学 号 20164331008 时间 2016 年 6 月 任课教师 吴序栎 摘 要：食品安全是关乎民生安全的重中之重，随着生活水平的提高，牛奶成了人民获取营养的一大来源，这一需求促进了牛奶企业的蓬勃发展，但是由于不法分子为了更高的利润向牛奶内添加化学物质应对安全检测，造成了恶劣影响及严重后果。本文主要就免疫分析技术在乳制品安全检测中的应用进行了探讨，以期在具体工作中有所裨益。 关键词：牛奶；免疫分析技术；检测技术； 引言 近年来发生了一些严重的牛奶质量安全事件，如“三聚氰胺”，这些问题让消费者对食品质量安全产生了担忧。应高度重视牛奶安全问题，完善检测技术，保障消费者的健康。因此，进一步加强牛奶的检测和监管，对于提高牛奶的质量安全具有十分重要的意义。免疫学技术具有简便、快捷、灵敏、高效、特异性强等优势，应用领域广泛，可用于检测食物中蛋白质、激素、药物残留、细菌、真菌、毒素及其他生理活性物质等。免疫学检测技术在牛奶质量检测分析中扮演着十分重要的作用。本文综合阐述几种常见免疫学技术在乳制品质量安全检测中的应用，介绍常用免疫技术在乳制品检测中的应用。 免疫分析技术的概况 1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)， 免疫测定技术。 免疫分析技术最突出的优点是操作简单，速度快、分析成本低。免疫测定法取样量小，前处理简单、容量大，仪器化程度低，检测牛奶的灵敏度高。是目前奶牛场和牛奶公司使用最广泛、快速、灵敏的检测方法。 酶联免疫技术 酶联免疫分析技术(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)问世以来，最早应用于黄曲霉毒素（AFT）的检测，黄曲霉毒素是一类化学结构类似的化合物，是二氢呋喃香豆素的衍生物[2-3]。目前发现的黄曲霉素有十几种，M1(AFM1)是黄曲霉毒素B1 的羟化代谢产物, 1963 年由Alleroft 首先发现, 1965 年被命名为黄曲霉毒素M1。AFM1 主要存在于动物的可食部分, 如肝脏、肌肉、血液等, 也可以通过尿液和乳汁排出。其理化性质很稳定, 牛奶经过巴氏消毒, 几乎不被破坏。AFM1 具有强致癌性和致基因突变性。AFM1 进入人体后, 对血液、肝脏、肾脏、肌肉有不同程度的破坏, 其中对肝脏和肾脏的危害最大。当与乙肝病毒共同作用于肝脏时形成倍乘风险效应, 导致肝癌发生。另外, 当婴幼儿乳品及母乳中含有AFM1 时,对婴幼儿健康会造成很大影响, 可以造成发育迟缓、肾功能降低、肝细胞癌早发甚至可能导致急性中毒死亡。近年来, 世界各国纷纷制定了乳与乳制品中AFM1 的限量标准。包括中国、美国和日本在内的许多国家规定奶及奶制品中AFM1 的含量不得超过0.5μg/kg, 欧盟制定的标准更为严格, 为0.05 μg/kg。其中, 中国规定婴儿乳品及代乳品中AFM1 不得检出[4-5]。由于黄曲霉毒素的限量要求低，但出现率高，因此需要采用准确灵敏的检测方法。 酶联免疫分析技术，指酶标记抗体或酶标记抗体进行的抗原抗体反应，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。 裴世春等[7]对直接竞争-ELISA 快速检测乳品中的AFM1 进行了研究。他们将辣根过氧化物霉(HRP)与高纯度抗AFM1 单克隆抗体进行偶联。检测范围是0.015~4.05 μg/L, 添加AFM1 至0.45 μg/L 的鲜奶样品中检测平均回收率为80%。 梁迪思等[8]通过使用甲醇/水(1:1, v:v)提取再经三氯甲烷净化的处理方法, 来对ELISA 检测婴幼儿配方奶粉中AFM1 含量方法进行改进。该方法的灵敏度为0.1μg/kg, 相对标准偏差为6.57%, 加标回收率为90.0%~105.6%。结果显示该方法重复性好, 有效地降低了假阳性的出现。 Kanungo等[9]提出超灵敏的夹心酶联免疫吸附法, 将AFM1的大鼠单克隆抗体在384 个微孔板上固定用来捕获AFM1 抗原。然后再加入被辣根过氧化