分子细胞生物学技术.pptx

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2017-05-24 发布于湖北
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分子细胞生物学技术.pptx

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分子细胞生物学技术

李特细胞生物学;杂交瘤技术;原理：;(一)细胞的选择与融合;(二)选择培养基的应用;细胞DNA合成一般有两条途径：从头合成途径：甲氨蝶呤是叶酸的拮抗剂，可阻断瘤细胞利用正常途径合成DNA；另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经次黄嘌吟磷酸核糖转化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)的催化作用合成DNA。细胞融合的选择培养基中有3种关键成分：次黄嘌呤(hypoxanthine，H)、甲氨蝶呤(aminopterin，A)和胸腺嘧啶核苷(thymidine，T)，所以取三者的字头称为HAT培养基。;HAT培养基培养细胞混合液7-10天：在用HAT选择培养1～2天内，将有大量瘤细胞死亡，3～4天后瘤细胞消失，杂交细胞形成小集落，HAT选择培养液维持7～10天后应换用HT培养液，再维持2周，改用一般培养液。;杂交瘤的克隆化;单抗大量制备方法;单克隆抗体的鉴定