第一章蛋白质化学2.pptVIP

核糖核酸酶变性与复性作用 蛋白质的紫外吸收光谱 1. 胰蛋白酶水解Lys 和Arg残基的羧基端； 2. 胰凝乳蛋白酶水解芳香族氨基酸残基的羧基端，如Phe、Trp 、Tyr。 问答题和计算题 * (一)、蛋白质的相对分子量 (二)、蛋白质的两性电离及等电点 (三)、蛋白质的胶体性质 (四)、蛋白质的沉淀反应 (五)、蛋白质的变性 (六)、蛋白质的颜色反应 七、蛋白质的性质 （一）蛋白质的相对分子质量(Mr) 蛋白质相对分子量在10 000 ~ 1 000 000之间。 测定方法：化学成分、渗透压法、超离心法、凝胶过滤法、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。 最准确可靠的方法是超离心法：蛋白质颗粒在25~50万倍重力场的离心力作用下从溶液中沉降下来。 沉降系数（ sedimentation coefficient, S）：单位（cm）离心场里的沉降速度。 沉降系数的单位常用S，1S单位=1×10-13（S） 根据化学成分测定最小相对分子质量 测定蛋白质分子中某一特殊成分的百分含量 根据其百分含量可计算出最低相对分子质量 （假定蛋白质分子中该成分只有一个）。 如所含已知成分不是一个单位，则真实相对分子质量等于最小相对分子质量的倍数。 最小相对分子质量＝（已知成分的相对分子、原子质量） /已知成分的百分含量 pH = pI 净电荷=0 pH pI 净电荷为正 pH pI 净电荷为负 Pr COOH NH3+ + H+ + OH- + H+ + OH- Pr COO- NH2 Pr COO- NH3+ 当蛋白质溶液在某一定pH值时，使某特定蛋白质分子上所带正负电荷相等，成为两性离子，在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值即为该蛋白质的等电点 （isoelectric point，pI）。 （二）蛋白质的两性电离及等电点 蛋白质电泳的方向、速度取决于其所带电荷的正负性、电荷数以及分子颗粒大小。 自由界面电泳：蛋白质溶于缓冲液中进行电泳。圆盘电泳：玻璃管中进行的凝胶电泳。 区带电泳：将蛋白质溶液点在浸了缓冲液的支持物上进行电泳，不同组分形成带状区域。 （1）纸上电泳：用滤纸作支持物。 （2）凝胶电泳：用凝胶（淀粉、琼脂糖、聚丙烯酰胺）作支持物。 平板电泳：铺有凝胶的玻板上进行的电泳。 等电聚焦电泳：利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。 （三）蛋白质的胶体性质 布郎运动、丁道尔现象、电泳现象、不能透过半透膜，具有吸附能力 蛋白质溶液稳定的因素：1）表面形成水膜（水化层） 2）带相同电荷 透析法：利用蛋白质不能透过半透膜的的性质，将含有小分子杂质的蛋白质溶液放入透析袋再置于流水中，小分子杂质被透析出，大分子蛋白质留在袋中，以达到纯化蛋白质的目的。这种方法称为透析（dialysis）。 应用 （四）蛋白质的沉淀反应 1. 加高浓度盐类：加盐使蛋白质沉淀析出盐析（ salting out）。 分段盐析：调节盐浓度，可使混合蛋白质溶液中的几种蛋白质分段析出。 2. 加有机溶剂：与水分子的竞争性结合作用。 3. 加重金属盐：硝酸银、醋酸铅、三氯化铁等。 4. 加生物碱试剂 单宁酸、苦味酸、钼酸、钨酸、三氯乙酸能沉淀生物碱，称生物碱试剂。 （五）蛋白质的变性(denaturation) 定义：天然蛋白质受物理或化学因素的影响，其分子内部原有的高度规律性结构发生变化，致使蛋白质的理化性质和生物学性质都有所改变，但并不导致蛋白质一级结构的破坏，这种现象称为蛋白质的变性作用。 特征： 1. 生物功能丧失 2. 理化性质改变：溶解度降低；结晶能力丧失； 3. 生化性质改变：肽链松散，反应基团增加， 易被酶消化。 变性因素：高温、高压、强酸、强碱、各种射线、某 些化学试剂。 复性(renaturation) 定义：当变性因素除去之后，已变性的蛋白质又可重新回复到天然构象，这一现象叫复性。 变性的应用 ①利用变性： 酒精消毒 高压灭菌 血清化验 重金属盐中毒 ②防止变性：低温保存生物制品 Native ribonuclease Denative reduced ribonuclease Native ribonuclease 8 M urea and