久效磷对斑马鱼胚胎发育的影响.docVIP

水中久效磷浓度对斑马鱼胚胎发育的影响 一、目的及意义 久效磷是一种高效的内吸性有机磷杀虫剂，具有很强的触杀和胃毒作用。杀虫谱广，速效性好，残留期长，对刺吸、咀嚼和蛀食性的多种害虫有效。作用机制为抑制昆虫体内的乙酰胆碱酯酶。久效磷还有一定的杀卵作用。 适用范围 适用于防治棉花、水稻、大豆、森林等作物上的多种害虫。近年来由于久效磷对环境的危害巨大，已经被列为禁止使用的农药。但是由于久效磷的残留期很长，所以环境中还残留很多，同时还有少部分地区无视禁令，仍在使用久效磷农药。 久效磷属于高毒性杀虫剂，本实验旨在深入探索久效磷对于水生生物生长发育的影响，以提醒大家我们的环境中存在很多有害因子。 二、实验原理 1.久效磷基本信息 英文通用名称 monocrotophos ?? 久效磷分子式 其它名称 纽瓦克 ；O,O-二甲基-2-甲基氨基甲酰基-1-甲基乙烯基磷酸酯 分子式：C7H14NO5P。　　分子量：223.16　　CASNO：6923-22-4 剂型： 50%久效磷水溶剂，纽瓦克40%水溶剂（Nuva-cron40SCW）,40%乳油。 2.斑马鱼基本信息 斑马鱼是一种常见的热带鱼。斑马鱼体型纤细，成体长3-4cm，对水质要求不高。孵出后约3个月达到性成熟，成熟鱼每隔几天可产卵一次。卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明。发育温度要求在25-31℃之间。由于斑马鱼个体小，养殖经费少，能大规模繁育且胚体透明，易于观察，是很好的实验材料。 3. 本实验采用斑马鱼作为实验生物，使其生长在不同浓度梯度的久效磷溶液中，研究对斑马鱼胚胎发育的影响。本次试验的影响因素是久效磷的浓度，通过研究斑马鱼胚胎在不同的浓度梯度下的致畸率达到实验目的。 三、实验材料 1.实验动物 卵裂期斑马鱼 2.试剂及仪器 久效磷试剂 烧杯、滴管若干，培养皿，显微镜、胚胎手术皿、28.5℃恒温培养箱、显微照像仪 四、实验内容 1）周六早上去实验室取卵裂期斑马鱼胚胎450个左右，再分别配置浓度为10-2 、10-1、1mg/l的久效磷溶液若干。 2）取胚胎手术皿，将个180胚胎随机分组，每个投放胚胎15个左右（分为4大组12小组，分别为A1、A2、A3，B1、B2、B3，C1、C2、C3，D1、D2、D3）。 3）设置一个对照组，三个实验组。其中对照组久效磷浓度为0mg/l，三个实验组久效磷浓度依次为10-2 、10-1、1mg/l。使得卵裂期斑马鱼胚胎在各久效磷浓度梯度下继续发育。 4）处理完毕后，将胚胎手术皿放入28.5度恒温培养箱中培养。培养期间每天换水2—3次，每次换水（与原浓度一致的水），水量量为原水量的1/2。 5）定时观察记录。不同时间间隔，在显微镜下观察不同胚胎时期（原肠胚时期、体节期、咽期、孵化期）的胚胎形状【每次观察的形态都要处于同一胚胎发育期】，拍照，同时统计每组畸形胚胎的数目，计算致畸率。 例如，原肠胚时期，胚胎发育停滞，形状保持在类似圆形，无集中延伸现象。 五 数据处理 原始数据记录表如下 各胚胎时期每组畸形胚胎数目 A B C D 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 原肠胚 体节期 咽期 孵化期 数据处理 1.各胚胎期每组致畸率 A B C D 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 原肠胚 体节期 咽期 孵化期 2、用t检验计算计算致畸率与久效磷浓度是否有关联及其可信度。 绘制致畸率与久效磷浓度的相关性曲线。 六 参考文献 [1] 房燕 汝少国 邴欣 姜明.久效磷对金鱼精巢超显微结构和特征性酶活性的影响.水产学报 2007，31（5）：568—574. [2] 邴欣 汝少国 姜明 王晓宇.久效磷对雄性金鱼的生殖毒性研究.中国海洋大学学报,2004,34(1):69-74. [3] 王摆 汝少国 王蔚. 久效磷对细小色矛线虫胚胎发育和繁殖的影响.中国环境科学.