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细胞工程中主要消毒灭菌技术综述 摘要：细胞工程领域的几乎所有工作都在离体培养细胞或组织的基础上进行，而无菌技术是进行离体培养的基础。微生物包括细菌、真菌、病毒等。微生物的种类不同，则灭菌的方法不同，灭菌效果也不同。 关键字：灭菌方法 特点 适用范围 在取材、接种、培养的各个环节以及利用培养细胞进行各种实验时，所用的器皿、培养基、实验材料等各种物品，都必须保持严格的无菌状态，操作人员也必须极强的无菌意识和具有良好的无菌操作技能，这是试验能够成功进行必须满足的基本要求。 根据对微生物的杀灭程度，杀菌可分为3个等级：灭菌、消毒和防腐。 灭菌是彻底杀菌，即用物理或化学等方法，杀死物体上的一切微生物，以及它们的芽孢或孢子，使物体成为无菌状态。 消毒是非彻底杀菌，即用物理或化学等方法，杀死物体上的有害微生物，但不能杀死全部芽孢。 防腐是抑菌过程，即用物理或化学等方法，防止或抑制微生物的生长繁殖。 消毒灭菌的方法很多，可大概分为物理和化学的两大类。 表1细胞工程中的主要消毒灭菌技术 物 理 灭 菌热 力 灭 菌 湿热灭菌高压蒸汽灭菌法常压蒸汽灭菌法间歇灭菌法干热灭菌火焰灭菌干热灭菌电离辐射灭菌紫外线杀菌过滤除菌化 学 杀 菌重金属盐类氧化消毒剂表面活性消毒剂甲醛其他一、物理灭菌 1.1热力灭菌（通过加热是微生物蛋白凝固变性） 1.1.1干热灭菌法 采用灼烧或干热空气灭菌的方法，称为干热灭菌。它包括火焰灭菌法和干热灭菌法。 火焰灭菌法是通过火焰高温灼烧进行灭菌的方法。耐热的接种环、接种铲、接种匙、接种针等，通过火焰灼烧可彻底灭菌；试管口和玻璃瓶口，通过几次火焰，温度可达200℃以上，可杀死一切微生物和芽孢，达到无菌程度。 干热灭菌是利用加热的高温空气进行灭菌的方法。干热灭菌适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌，但不适用于含水分的培养基材料。由于干热空气穿透力差，加之微生物蛋白质在干燥条件下不易凝固变性，故干热灭菌的温度，一般要求掌握在160℃，维持40min～2h。 1.1.2湿热灭菌法 利用蒸汽或沸水灭菌，湿热穿透力强，蛋白质、原生质胶体在湿热情况下容易变性凝固，因此在同样温度下，湿热灭菌效果比干热好。湿热灭菌法适用于耐高温、不忌水的物品。常用的湿热灭菌方法有： （1）高压蒸汽灭菌法 即利用高温高压蒸汽进灭菌的方法。高压蒸汽灭菌可以杀死一切微生物，包括细菌的芽孢、真菌的孢子或休眠体等耐高温的个体，是湿热灭菌法中效果最好的。高压蒸汽灭菌法一般在121℃下处理15～30min，可达到灭菌目的。适用于各种耐热物品的灭菌，如一般培养基，生理盐水等各种溶液，玻璃器皿，工作服等。 （2）常压蒸汽灭菌法 即采用自然压力的蒸汽进行灭菌的方法。利用常压蒸汽灭菌时，灭菌物品在灭菌锅内排列不能过密，要保证蒸汽能在锅内均匀地流通。流通蒸汽的温度一般为100℃左右，要杀死耐热性的芽孢，必须延长灭菌时间，一般为6～8h （3）间歇灭菌法 将待灭菌物品经三次灭菌，每次灭菌条件为100℃、20～30min，以杀死其中的细胞营养体。每次灭菌后置灭菌物品于室温或温箱中培养约24h，使芽孢萌发长成营养体，再次灭菌时被杀死。此法比较费时，一般适用于某些不耐高温的物品和培养基的灭菌。 1.2电离辐射灭菌 利用α射线、β射线、γ射线和X射线等，波长极短，辐射能很大的射线，照射物质，使其电离（干燥状态）或在液体中，使水电离成氢、氧离子作用于微生物本身，致使微生物死亡。 辐射灭菌不使物体升温，而且穿透力强，可直接对灭菌包装的物品进行灭菌。适用于处理量大且不适合高压或过滤等方法消毒的培养用品，培养工作中和临床上所用的多种一次性器械与物品，如培养皿、培养板、注射器、移液器吸头、离心管等，都可以经辐射灭菌。但电离辐射灭菌需要专门的设备和专业人员操作。 1.3紫外线杀菌 利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。紫外线的作用机制是通过直接破坏微生物的核酸及蛋白质等使其灭活，以及间接通过UV照射产生的臭氧杀死微生物。适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。灭菌时间为30 min。用紫外线杀菌时应注意，不能边照射边进行实验操作，因为紫外线不仅对人体皮肤有伤害，而且对培养物及一些试剂等也会产生不良影响。 1.4过滤除菌 过滤除菌是通过机械性阻留微生物而达到无菌要求。过滤除菌法大多用于遇热易发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液等。目前，常用微孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细菌滤器、滤球负压过滤除菌。滤膜孔径应在0.2