第三章 微生物检测用标准物质的使用及管理.ppt

第三章 微生物检测用标准物质的使用及管理 教学目标： 熟知微生物检测用标准物质的使用及管理、了解抗生素效价复核。 教学重点： 微生物检测用标准物质的使用及管理 教学难点：抗生素效价复核 一、概述 二、抗生素标准品 三、微生物菌种的使用、保存与管理、验证 四、细菌内毒素标准品与鲎试剂 第三章 微生物检测用标准物质的使用及管理 一、概述 标准物质是用来标定仪器，验证测量方法或鉴定其他物质的，是有一种或多种性能的材料物质。而药品标准物质是执行药品标准的基础，它是用于检查药品质量的一种特殊的专用量具，是一类与其它领域不同的特殊标准物质。 生物标准物质是用于那些不能用化学或物理量表示强度，而只能用生物方法测定效价的品种。只有当被测物质纯度提高，结构清楚后用理化方法控制质量分析条件成熟后，该品种的化学测定用标准物质即应建立，生物标准物质则完成其使命而停用。 医药工业微生物检验室常用的标准品或对照品 标准品或对照品的一般控制包括 (一) 标准品和对照品的来源 (二) 标准品、对照品的保管 (1) 微生物检验室指定专人负责标准品、对照品的保管。(2) 订购的标准品或对照品到货后，由负责标准品或对照品保管的人员检查验收并及时填写标准品、对照品接收及使用记录。记录内容应包括：编号、品名、批号、来源、数量（支）、购进日期、领用数量、领用日期、领用人、结余、备注。 (四) 标准品或对照品的销毁及使用记录 标准品或对照品使用完毕或过期之后都应及时销毁，并在标准品、对照品接收及使用记录上填好销毁及使用记录。 (五) 定期对标准品或对照品进行抽样检查 定期抽样检查至少每季度1次，应填写标准品或对照品检查表 并归档保存，标准品或对照品检查表的内容为：检查日期、抽样品名、批号、登记数量、实际数量、品质证书（有、无）存储条件（对、不对）、冰箱温度计录（有、无）、管理员签名、检查员签名。 二、抗生素标准品 (—) 使用与保存 1. 安瓿管的开启 (二) 抗生素效价复核 必须按《中国药典》抗生素微生物检定法中的三剂量法要求对工作标准品进行效价复核实验。每次实验均应称取2份国家标准品和2份需测工作标准品进行平行试验，每组实验应不少于9个平皿，实验结果的可信限率应不得大于 5%，结果取平均值。该实验需反复多次地在不同操作人员间进行，以积累充分多的数据满足统计需要。最后，将所得结果进行统计合并计算（不是求平均值，具体方法可参见本书第八章的内容或《中国药典》生物检定统计法中的实验结果的合并计算），才能得出被测工作标准品较为客观的效价。各实验室自行标定的工作标准品只能在本室内使用。 复核试验应由具有一定实验操作经验的人员进行。根据所要分析的抗生素类型，来确定采用管碟法还是采用比浊分析法。本文以管碟法为例，介绍工作标准品的复核和评价方法。 按《中国药典》(2005版)要求，用标准贮备液稀释制备3种不同浓度的标准液，如80%、100%和125%。这3种浓度的对数值间是等距离的，因此在检测结果的统计学计算中可采用一常数表示。国家标准品的浓度分别用U1、U2和U3表示低、中、高3种浓度。 本法采用随机编码方式，在平皿内的琼脂培养基表面摆放6个不锈钢小管，向每个管内加入不同浓度的溶液。每个工作标准品的称量样品要求做12只平皿。在规定条件下培养，培养时间结束后，目测检查每个平皿，看是否抑菌区不正常或不含抑菌区的平皿，并剔除不正常的平皿，从目测结果良好的平皿中随机选取其中的9只，用适当的仪器(如zy-300IV多功能微生物自动测量分析仪)准确量出每个抑菌圈的直径。 无论是在进行抗生素效价复核还是平时进行效价的正式测定操作之前，都应先进行菌液浓度的预测试验。其目的是选择适宜的菌液浓度，使被测抗生素标准品溶液所致的抑菌直径在《中国药典》规定范围内，2.2法标准品溶液高浓度所致的抑菌圈直径在18~24mm；3.3法标准品溶液中心浓度所致的抑菌圈直径在15~18mm。 其操作方法是： (1) 按无菌操作往双碟内加入加热融化后的底层培养基20ml，用陶瓦盖覆盖，待其凝固。 (2) 取加热融化后的菌层培养基20ml，待其降至规定温度将试验菌加入培养基内，摇匀，吸取5ml均匀摊布在底层培养基上，用陶瓦盖覆盖，静置约10~20min。 （3）在制备好的双碟上等距离放置小钢管2~3个，在小钢管内滴加欲测抗生素的标准溶液。 （4）滴加完毕，用陶瓦覆盖，小心移置培养箱内，按规定的温度和时间进行培养。 （5）取出培养好的双碟，用卡尺测量抑菌圈直径。若所试抑菌圈直径超过规定范围，可调整加菌量或调整抗生素标准品