猕猴难治性癫痫模型的建立及机制研究（学术论文）.pptVIP

马桑内酯致恒河猴颞叶癫痫耐药模型的建立及机制研究 立项依据㈠恒河猴颞叶癫痫耐药模型的建立 癫痫是最常见的神经系统疾病之一，在我国发病率为35/10万·年，患病率为5‰，其中难治性癫痫约占30％ 颞叶癫痫是成人中常见的癫痫类型，约60－70％的患者为难治性癫痫，预后较差 难治性癫痫尤其是颞叶难治性癫痫的基础研究和临床治疗是世界神经病学界研究的热点。 癫痫动物模型在癫痫发生机制和治疗研究中具有重要的作用。 目前癫痫动物模型比较多，但是难治性颞叶癫痫动物模型却很少 点燃癫痫模型是应用最广泛的癫痫模型，其发病机制被认为与人类癫痫的发病机制相似 点燃模型 化学致痫剂匹罗卡品、红藻氨酸和戊四唑等点燃啮齿类动物模型，电刺激脑内敏感部位如杏仁核点燃的动物模型和经双侧角膜反复电刺激（角膜点燃）点燃的模型等， 有些模型被认为是难治性癫痫模型，但是它们对标准抗癫痫药物耐药发生率低，而且存在对药物反应不稳定的现象 我们通过肌肉局部注射马桑内酯的方法，于2001年成功建立和证实了马桑内酯点燃大鼠癫痫模型为颞叶癫痫耐药性模型，并发现点燃模型脑血管内皮细胞和血脑屏障周围星形胶质细胞P-gp蛋白表达明显高于对照组。 该颞叶癫痫模型优点是建立容易，点燃率高，而且对标准抗癫痫药物卡马西平，苯妥英钠，丙戊酸钠耐药 国内外第一个该致痫剂点燃的颞叶癫痫耐药动物模型，并在国内外申请了自主知识产权 啮齿类动物与人类的种属差异较大 恒河猴属灵长类动物，在解剖、生理机能及生化代谢等方面与人类相似，是了解人类生理和病理生理知识的理想实验动物 目前灵长类动物癫痫模型研究较少，国内尚未有报道，国外也主要局限在脑内局部注射致痫剂如氧化铝凝胶、荷包牡丹碱等和电刺激杏仁核、扣带回等点燃模型 探索性用马桑内酯阈下剂量肌肉注射点燃的方法建立灵长类动物恒河猴颞叶癫痫耐药模型，该模型将是世界上第一个化学性点燃的灵长类动物颞叶癫痫耐药模型 该模型的成功建立将有助于研究癫痫发生过程的机制以及癫痫耐药的机制，精确定位癫痫的发生区域并研究痫性活动扩布模式，有助于抗癫痫药物的筛选和新型抗癫痫药物的研发，并为癫痫预防及治疗的研究提供载体。 ㈡癫痫发生过程以及病程发展的机制研究 癫痫发生过程以及病程发展的机制目前还不是很清楚 磁共振弥散张量成像（DTI）和EEG–fMRI是新发展的技术，可以在活体检测病变区域并定位癫痫灶 组织病理学的方法研究在模型建立前后不同脑区域组织结构的变化 因此拟联合应用上述技术，研究在活体模型建立前、建立过程中、建立后不同脑区域组织病理和功能的动态变化，进一步了解癫痫发生发展的机制，为癫痫发生的预防提供理论依据 ㈢颞叶癫痫耐药机制的研究 癫痫耐药性机制目前还不明确 目前认为多耐药蛋白尤其是P-gp的过度表达是抗癫痫药物耐受的重要机制 RNA干扰技术是比较成熟的基因沉默技术，目前应用广泛 通过RNA干扰沉默多药耐药蛋白P-gp的表达可以抑制P-gp“药物泵”的作用，从而逆转耐药，这在肿瘤耐药的研究中已经得到证实 在成功建立恒河猴颞叶癫痫耐药模型的基础上，通过RNA干扰技术沉默多药耐药蛋白P-gp的表达 用抗癫痫药物评价MDR1沉默后的药物治疗效果，明确P-gp在癫痫耐药中的作用，并可能为难治性癫痫的治疗开辟新的途径。 研究主要内容 一 灵长类动物恒河猴难治性颞叶癫痫模型的建立 1 马桑内酯点燃恒河猴颞叶癫痫模型的建立 2 通过恒河猴行为学和脑电图评价该模型 3 用标准抗癫痫药物卡马西平、丙戊酸钠、苯妥英钠筛选耐药模型 二 马桑内酯点燃恒河猴颞叶癫痫模型的机制研究 1 通过组织病理学的方法研究在模型建立过程前中后不同脑区域组织结构的变化 2 DTI技术研究在模型建立过程前中后不同脑区域的病理变化 3 EEG–fMRI技术研究在模型建立过程前中后不同脑区域功能的动态变化，并研究其与脑电图癫痫波的关系,定位癫痫灶，并进一步证实该模型为颞叶癫痫模型。 三 灵长类动物恒河猴颞叶癫痫模型耐药机制的研究 1 通过组织病理学方法检测模型不同脑区域多药耐药蛋白P-gp的表达变化及区域差异 2 通过RNA干扰技术在体沉默P-gp的表达 2.1 组织病理学技术检测基因沉默前后P-gp表达的变化 2.2 荧光定量PCR的方法检测MDR1mRNA基因沉默前后的水平 3 耐药模型基因沉默后标准抗癫痫药物治疗效果评价 3.1 通过治疗前后行为学变化评价 3.2 通过治疗前后脑电图变化评价 3.3 脑脊液/血液抗癫痫药物浓度比值的变化 拟解决的关键问题 猕恒河猴颞叶癫痫耐药模型的建立及评价依据 神经影像学研究的实施及DTI和EEG–fMRI研究数据的分析 RNAi技术在恒河猴活体的应用 实验方案 ㈠灵长类动物恒河猴颞叶癫痫耐药模型的建立 实验动物共24只：阴性对照组