基因工程课件要点.ppt

* 一般使用BamHI的作用应该是：1、BamHI翻译以后是Gly-Ser，分子量小，用于linker柔性比较大，不会影响翻译产物的构象；2、BamHI具有同尾酶BglII，两个酶的酶切效率都很高，一般载体中常有，所以很适合用于串联体等构建。 应用同尾酶技术将同一抗原片段多拷贝化。 * 聚乙二醇溶于水、甲醇、苯、二氯甲烷，不溶于乙醚和正己烷。它与疏水性分子结合后的产物可用作非离子表面活性剂。 聚乙二醇可以用于修饰药物蛋白，以保护药物分子延长其作用半衰期。 原理：由于PEG为液体、它具有与各种溶剂的广泛相容性，是很好的溶剂和增溶剂，被广泛用于液体制剂。 本系列产品无毒、无刺激性，具有良好的水溶性，并与许多有机物组份有良好的相溶性。它们具有优良的润滑性、保湿性、分散性、粘接剂、抗静电剂及柔软剂等，在化妆品、制药、化纤、橡胶、塑料、造纸、油漆、电镀、农药、金属加工 生物工程及食品加工等行业中均有着极为广泛的应用。 在近代微生物细胞融合技术中常被用作细胞融合剂（分子量1000~4000） * 什么是缺口平移法和取代合成法？ * S1核酸酶作图：三种不同的核酸酶——S1核酸酶、RNA酶、外切核酸酶Ⅶ被用来进行RNA定量，确定内含子位置，以及用来鉴定在克隆的DNA模板上的mRNA 5′端和3′端的位置。当检测RNA被杂交到DNA模板上时，用核酸酶S1进行保护试验的分析；当检测RNA被杂交到来自DNA模板的RNA上时用RNA酶。外切核酸酶Ⅶ有更专一的用途——对短的内含子作图并解决S1核酸酶保护试验中出现的异常情况。 用S1核酸酶绘制mRNA 5′端和3′端图谱，很得要的一点是要用独立的技术如引物延伸来加以验证。 * * * 德国人H.Bernstein(Bernstein,德语 琥珀) 发现T4噬菌体突变型，so named噬菌体T4的“琥珀型”突变种；又 在其上发现了一个密码子UAG，是无义密码子，又称为琥珀密码子。 密码子改变为UAG的无义突变又叫琥珀突变，密码子改变成UAA的无义突变又叫赭石突变。 * 单链（+链）环状噬菌体，雄性专一性丝状噬菌体。 基因V的蛋白与正链DNA结合形成单链DNA-蛋白复合物，特异性抑制+ DNA复制负链DNA的活性，导致宿主细胞内+ DNA大量积累。然后正链DNA-蛋白V复合物移至宿主细胞的膜间隙中，定位在此的已经合成的包装蛋白系取代蛋白V，将正链DNA装配成成熟的噬菌体颗粒。 蛋白III形成四聚体，位于丝状噬菌体的一端；与性伞毛吸附，向导作用。 VIII是主要包装成分。 * +ssDNA，温和型，感染雄性细菌；复制形式RFDNA，利用细菌ＤＮＡ合成酶－－DNA聚合酶。 M13DNA的复制起始位点定位在基因间隔区内。但是基因间隔区的有些核苷酸序列即使发生突变、缺失或插入外源DNA片段，也不会影响M13DNA的复制，这为M13DNA构建克隆载体提供了条件。较大的间隔位于基因 Ⅷ 和基因 Ⅲ 以及基因 Ⅱ 和基因 Ⅳ 之间，其间有调节基因表达和 DNA 合成的元件。 所有结构蛋白在形态发生之前都插入在宿主细胞的质膜中。 II 和 IV之间可以插入基因 * 3.2 大肠杆菌的M13单链噬菌体DNA M13 DNA载体的构建： III VI I IV II X V VII IX VIII 野生型M13RF-DNA III VI I IV II X V VII IX VIII M13mp系列载体 lacZ‘ polylinker 3.噬菌体或病毒DNA * 3.噬菌体或病毒DNA 3.2 大肠杆菌的M13单链噬菌体DNA M13 DNA载体的特点： 使克隆的DNA片段以特定单链的形式输出受体细胞外 这在DNA定向突变中非常有用 M13重组分子筛选简便 被M13噬菌体感染的受体细胞生长缓慢，形成混 浊斑，易于辨认挑选。而且重组分子越大，混浊 斑的混浊度亦越大 但M13-DNA载体的最大缺陷是装载量小，只有1.5 kb * 3. 噬菌体或病毒DNA 与动植物受体细胞相适应的载体一般选择相应动植物的病 毒基因组DNA。 动植物病毒种类繁多，每一种动植物都有多种特异性的病 毒。按照基因组的结构，可将动植物病毒分成四大类： 单链DNA病毒 双链DNA病毒 单链RNA病毒 双链RNA病毒 RNA病毒在自我复制时大多存在相应的DNA中间反应物， 这些中间体可作为载体进行常规的DNA重组。 3.3 动植物病毒DNA * * * SV40 是实验室常用作 研究分子病毒学的重要工具， 它是在用猴肾细胞培养制备 脊髓灰