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学兔兔 第44卷 第7期 化 工 技 术 与 开 发 V01．44 No．7 2015年7月 TechnologyDevelopment of Chemical Industry Ju1．2015 焦磷酸抑制聚T模板CuNPs合成的非标记荧光探针用于碱 性磷酸酯酶活性的测定 来倩倩 (浙江省碳材料温州大学化学与材料工程学院碳材料技术研究重点实验室，浙江 温州 325027) 摘 要：近年来，作为非标记的荧光探针，以DNA为模板制备的荧光纳米材料因其具有光稳定性、生物相容性、 无毒性等优点，被广泛应用于生物分析领域。针对一些检测生物酶存在的成本高、灵敏度低、操作复杂等问题，本 文基于焦磷酸 (PPi)对聚1链为模板的荧光铜纳米颗粒的形成具有很强的抑制作用，发展了一种非标记的荧光增强 的方法用来检测碱性磷酸酯酶活性。该方法不仅直接在均相溶液中就可进行，而且所需时间短，成本低廉。其检测 下限达到0．5U·I『 。 关键词：碱『生磷酸酯酶；铜纳米颗粒 中图分类号：0629．8 文献标识码：A 文章编号：1670-9905(2015)07-00010-04 碱性磷酸酯酶(ALP)是一种广泛分布在人体 传统的用来评估ALP酶催化PPi水解能力的 各个组织中的蛋白酶【l】。它作为一种常用的生物标 方法主要是依据对水解所得磷酸根(Pi)的比色分 记物在酶免疫测定、基因分析、组织化学的染色等方 析或者是对PPi中的磷(P)进行放射性标记以充当 面被应用于检测蛋白质、药物、核酸和其它分析物。 检测所需的信号标记[12-13]0这些方法大多操作起来 由于ALP酶去磷酸化的底物分布比较广泛，所以对 比较复杂，而且有的方法还需要标记，获得的信号的 于不同的去磷酸化底物，ALP酶表现出来的作用不 灵敏度还比较低。因此，目前急需发展一些简单快 同。临床上，人体血清中ALP酶含量的多少与很多 速、灵敏度高、选择性好的非标记的光学检测方法用 疾病有关，比如骨骼、肝胆系统的疾病等[2-51o此外， 来研究ALP酶对底物PPi的水解作用。但是这些 ALP酶与其他一些酶是同源的，并表现出一部分同 已有的报道fl 】主要是通过溶液中电解质的共轭作 样的催化性能[6J。因此，采用自然底物代替人工合 用产生的，溶液中带电荷的物质对其的干扰比较大， 成的显色底物对ALP酶的活性进行测定，也许能够 得到的信号也比较弱。 更加快速直接地研究出ALP酶的相关功能【7]。然 近年来，纳米技术发展飞速，采用纳米材料作为 而，大量的天然底物中只有少量的含磷酸基团的底 分子探针对生物分子进行定量和定性的分析越来越 物被认可并充当ALP的底物，焦磷酸(PPi)就是这 引起研究者们的关注。随着聚T链可以作为合成荧 些被确认的底物中的一种。有报道[8-91指出PPi充 光铜纳米颗粒的模板这一文献的报道【1 ，这种新型 当ALP酶底物时，所需的最适pH值比较低，水解速 的材料可以用来作为荧光指示探针，应用于生物传 度也比较慢。由于焦磷酸(PPi)能够抑制骨骼的矿 感器中。本文中基于焦磷酸(PPi)对以聚T链为模 化，所以，在机体组织中ALP酶可以催化PPi水解， 板的荧光铜纳米颗粒的形成具有很强的抑制作用， 进而使骨组织中的PPi的浓度维持在一个特定的范 发展了一种非标记的荧光增强的方法，用于碱性磷 围内，确保骨骼正常的矿化n讯。PPi同样也可以抑 酸酯酶活性的检测。相比其他传统的检测A