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红车轴草中异黄酮提取工艺研究 周振亚，白高英，赵志光 兰州大学生命科学学院，兰州 （730000） E-mail：zhoulei0558@163.com 摘 要：本文通过正交试验的方法，对结果采用Hplc 检测，着重考察红车轴草异黄酮的提 取各种试验条件，筛选出得率和纯度都较高的方法，以每次所得到的总异黄酮质量的多少来 衡量方法的好坏。试验表明在异黄酮提取的初步阶段，采用 75%的乙醇溶液, 10 倍料液比, 70℃浸提1 小时，其得到的纯度有7 %左右，产品得率最高。 关键词：红车轴草；异黄酮；提取；正交试验；HPLC 1．引言 红三叶Trifolium pratense 为豆科车轴草属多年生草本植物。红三叶也称红车轴草，红花 苜蓿。原产于小亚西亚及欧洲西南部，是欧洲、美国东部、新西兰等海洋性气候地区的最重 要的牧草之一，在英国和新西兰为第二大豆科牧草[1],是我国长江流域以南地区优良的豆科牧 草和蜜源植物。甘肃岷县于 1940 年由美国引进红三叶，经过多年的驯化、选育，成为当地 的优势草种。1987 年经全国饲料牧草品种审定委员会审定登记为“岷山红三叶”[2]， 岷山红 三叶蛋白质含量高、营养丰富，是著名的优质牧草。 [3] 红三叶是豆科植物中异黄酮含量最高(1.5%-2.5%)的植物 ，异黄酮有重要的药用功效， 所以红三叶草可以用来做药材，而不仅仅只用来做牧草。 异黄酮是一种生物活性物质，属于黄酮类化合物，分布比较少，几乎全部分布在豆科植 物 Papilionoideae 亚科的一些属中[4]，比如大豆，三叶草，葛根，苜蓿。天然存在的异黄酮 分为游离型的苷元和结合型的糖苷两类。一般游离的苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇，乙 醇，乙酸乙脂，乙醚等有机溶剂，以及稀碱溶液中。结合型的糖苷一般易溶于水，特别是碱 性水溶液，还可溶于甲醇，乙醇等强极性溶剂中，但是难溶或不溶于苯，氯仿等有机溶剂中 [5] 。红三叶的主要异黄酮成分含有：樱黄素 、德鸢尾素、鹰嘴豆牙素 A 、芒柄花素、染料 [6] 木素、红车轴草素、毛蕊异黄酮、大豆素等，其中以鹰嘴豆牙素A 和芒柄花素含量最高 。 异黄酮具有多种药用功效。可以预防和治疗妇女更年期综合症，防癌抗癌,降低心血管 [7] 疾病的发病率、预防骨质疏松症。异黄酮具有植物雌激素的作用 。异黄酮可以减轻妇女更 年期综合症，更年期妇女雌激素分泌减少，而异黄酮的摄入可以作为激素的补充，从而减轻 病症。100 多个体外研究发现,异黄酮可以抑制多种癌细胞的生长,包括乳腺癌、肠癌、肺癌、 [8] 。异黄酮可阻止胆固醇氧化，还具有抑制血小板凝集、阻止平滑肌细胞 白血病、前列腺癌 增殖的作用，因而异黄酮可以预防心脑血管疾病。对于骨质疏松，研究表明异黄酮也有明显 效果。 异黄酮有这么多药用功效，但目前国内外主要从大豆中提取。相对于大豆提取，从红三 叶草总提取有明显优势。红三叶草中异黄酮含量 1.5%-2.5%，比大豆的0.1%-0.5%[9]，高出 十几倍。 关于异黄酮的提取，主要由有机溶剂提取法和吸附法[10] 。有机溶剂提取法，工艺简单， 可操作性强，工业应用的可能性大。有机溶剂的选取，要求对目标成分溶解性大，对共存杂 质溶解性小，不与目标成分起化学反应，还要廉价易得，浓缩方便，作为药物提取，溶剂还 要考虑到其安全性[11] 。一般粗提物，浸提过程以食用酒精为溶剂居多，本实验主要采用有 - 1 - 机溶剂提取法，研究红三叶草中异黄酮提取的最佳工艺。对干燥红三叶草进行粉碎，后用乙 醇对粉末进行浸提