山东栽培黄芩的指纹图谱研究.docVIP

　　山东栽培黄芩的指纹图谱研究 【摘要】 　　目的采用高效液相色谱（HPLC）对山东栽培黄芩药材进行指纹图谱的研究，为黄芩药材质量控制提供实验依据。方法采用kromasil C18，5μm，150 mm×4.6 mm色谱柱，以乙腈0.3%磷酸为流动相进行梯度洗脱，流速1 ml/min，柱温30℃，检测波长280 nm。结果以10个共有峰为评价指标，精密度和重复性实验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%，符合有关规定要求。结论该方法操作简单，精密度、稳定性和重复性良好，可作为栽培黄芩药材的质量控制的新方法。 【关键词】 黄芩 指纹图谱 高效液相色谱法 　　色谱指纹图谱分析技术是当前进行复杂物质体系质量控制及研究的重要手段。以中药色谱指纹图谱为代表的一类狭义的化学指纹图谱，着眼于生物代谢产物化学特征的分析与质控模式研究，所形成的理论和技术涉及多个前沿研究领域与交叉学科，有力促进了中药质量控制模式的 发展 ，同时也符合中药 现代 化发展的必然趋势和要求。因此色谱指纹图谱分析技术目前已逐步成为中药质量评价的关键技术［1］。 　　黄芩为唇形科植物黄芩Sutellatia baicalensis Georgi.的干燥根。黄芩最早收载于《神农本草经》，为传统常用中药，具有清热燥湿解毒，止血安胎的功效。随着中药野生资源的逐渐减少和 自然 环境保护的需要，以人工栽培品入药已成为主流，人工种植具有产量大、价格低、环境条件稳定可控等优点，近些年国家也在逐步推行GAP规范化种植基地的建设。黄芩作为山东道地药材目前种植面积非常大，全省种植在6 667 ha以上，且在全国普遍被认为是优质产品，以青岛和文登所产的最著名，有“条芩”“文芩”之称［2］。本文利用HPLC法建立山东栽培黄芩的指纹图谱，利用软件生成对照指纹图谱，为更有效控制栽培黄芩质量，从而为建立符合规模化生产的黄芩基地提供更 科学 的数据。 　　 1 仪器与试药 　　1.1 仪器与试剂poasil C18，5 μm，150 mm×4.6 mm，检测波长280 nm，流速1 ml/min。结果选定以0 min比例13∶87，25min比例为20∶80，45 min比例为30∶70，55 min比例为40∶60，65 min回到原始比例的梯度洗脱，分离效果最好。 　　2.2 检测波长的选择 《中国药典》明确黄芩苷在280 nm处有最大吸收，因此选择250，260，270，280，290，300，310，320 nm波长进行考察。最后结果显示在280nm波长下各特征峰吸收度差别较小，整个图谱中各峰之间的比例较协调，直观效果较好，提供信息量较大。 　　2.3 流速和柱温的考察 取同一批样品，按上述测定方法，对流速0.8 ml/min，1.0 ml/min，1.2 ml/min分别进行考察。结果表明，不同流速，除了保留时间有所改变外，峰形及分离情况均不受影响，按常规，选择流速1.0 ml/min。柱温选择30，35，40℃进行考察。结果表明，30℃柱温时色谱峰分离最好。 　　2.4 样品提取溶剂的选择取同一批样品，精密称取0.1 g 3份，分别加醋酸乙酯－甲醇（3∶1），氯仿甲醇（1∶1），70%乙醇各20 ml，加热回流2 h，放冷，滤过，滤液蒸干，用色谱甲醇转移并定容至10 ml容量瓶，过0.45 μm的滤膜，即得供试品溶液。测得指纹图谱。结果显示，用醋酸乙酯甲醇（3∶1）作溶剂时图谱信息量最大且各峰比例协调。 　　2.5 参照峰的选择用上述色谱条件，分别注入液相色谱仪黄芩苷和黄芩素对照品溶液10 μl，进行测定。结果黄芩素在整个色谱图的最后位置出峰，而黄芩苷出峰时间适中且分离良好，因此选择黄芩苷作为参照物［4］。 　　2.6 评价系统 采用国家药典委员会开发的中药色谱指纹图谱相似度评价系统试用版(2004A) 。 　　2.7 供试溶液的制备 　　2.7.1 对照品溶液的制备分别精密称定黄芩苷对照品和黄芩素对照品适量，加色谱甲醇溶解并稀释成60 μg/ml和0.1 mg/ml的溶液。 　　2.7.2 供试品溶液的制备 取黄芩药材中粉0.1g，精密称定，加醋酸乙酯－甲醇（3:1）20 ml，加热回流2 h，放冷，滤过，并用少量提取溶剂洗涤容器和残渣，滤液蒸干，用色谱甲醇溶解并移至10 ml容量瓶中定容，过0.45 μm滤膜，即得供试品溶液。 　　2.8 方法学考察 　　2.8.1 精密度 取黄芩样品一批，制备供试品溶液。按上述方法重复进样6次，考察精密度。考察10个主要色谱峰的相对保留时间的RSD为0.028 9%～1.073 4%，峰面积大于5％的共有峰峰面积的RSD为0.281 6%～2.955 5%，均符合规定。将色谱图导入中药色谱指纹图