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鱼类急性毒性试验 实验报告 姓名：杜月文 学号：9110219 一、目的与要求 通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析和报告等全过程。 二、基本原理 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96 h为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 三、实验材料 1．实验鱼的选择与驯养 试验用的鱼必须对毒物敏感，具有一定的代表性，便于实验条件下饲养，来源丰富，个体健康。本实验选用金鱼作为实验鱼。 选择同属、同种、同龄，当年生的金鱼。鱼的平均体长以7cm以下为合适。金鱼体短、身宽，一般以3cm以下较为合适。同组鱼中最大的体长不应超过最小的体长的1.5倍。 选用的试验鱼首先在试验前在实验室内经过驯养，使之适应实验室条件的生活环境和进行健康选择。驯养期间，应每天换水，每天喂食1-2次，在试验前一天停止喂食，以免试验时，剩余饵料及粪便影响水质。驯养期间试验鱼死亡率未超过5％。 试验选择体色光泽、鱼鳍完整舒展、行动活泼、逆水性强、大小无太大悬殊、无任何疾病的鱼作为试验鱼。 2．实验仪器设备 （1）实验容器 实验容器选用玻璃鱼缸，容器为2.5L。采用相同大小的鱼缸15个。为防止鱼类跳出容器，在容器上加上网罩。实验容器使用后，彻底洗净，以除去所有毒性残留物。 （2）其他 溶解氧测定仪、水硬度计、温度控制仪、pH计、分析天平。 3．实验用水（稀释水）及水质条件 用来驯养和配置实验液的水，用自来水代替天然河水、湖水或地下水，进行人工曝气脱氯。实验用水的水质条件一般是指水的温度、pH、溶解氧、硬度、水中的有机物和水量等。 （1）水温 实验中保持鱼类原来的适应温度，为5℃左右。通过加热室内的空气温度而达到调节水温的目的，也可以采用电热棒直接控制调节水温。 （2）pH 水的pH与水生生物的代谢作用有密切关系。对毒物的毒性作用也有一定的影响。因此，在实验中应维持pH在鱼类适宜范围内。一般实验液的pH在6.7～8.5为宜。如需调节pH，可用1M或0.1M的HCl和NaOH来调节受试物贮备液的pH。调节贮备液的pH时不能使受试物浓度明显改变，或发生化学反应或沉淀。 （3）溶解氧 溶解氧是鱼类生存的必要条件，它能影响鱼类对毒物的敏感性。一般温水鱼要求溶解氧在4mg/L以上，冷水鱼要求溶解氧在 5mg/L以上。 （4）硬度 水的总硬度为 10～250 mg/L（以CaCO3计）。 四、操作步骤 1．预实验 用确定正式实验所需浓度范围，可选择较大范围的浓度系列，本次实验选择600mg/L、500mg/L、400mg/L、300mg/L、0mg/L。每个浓度放入五条鱼，可用静态方式进行，设置三组平行实验，试验持续48～96h。每日至少两次记录各容器内的死鱼数，并及时取出死鱼。求出24h100％死亡浓度和96h无死亡浓度。 如果依次预试验结果无法确定正式试验所需的浓度范围，应另选一浓度范围再次进行预试验。 2．正式实验 根据预试验得出的结果，在包括使鱼全部死亡的最低浓度和96 h鱼类全部存活的最好浓度之间至少设置5个浓度组，并以几何级数排布。浓度间隔系数应≤2.2。 每个试验浓度组应至少设2～3个平行，每一系列设一个空白对照。如使用了助溶剂，应增设溶剂对照组，其浓度与试剂中的最高溶剂浓度相同。试验鱼的数目以每组实验浓度10～20尾合适，不得少于10尾。 试验溶液调节至相应温度后，从驯养鱼群中随即取出鱼并随机迅速放入各试验容器中。转移期间处理不当的鱼均应弃除。同一试验，所有试验用鱼应30min内分组完毕。 在24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况。如果没有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动、碰触尾柄后无反应等，即可判断该鱼已死亡。观察并记录死鱼数目后，将死鱼从容器中取出。应在试验开始后3h或6h观察各处理组鱼的状况，并记录试验鱼的异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积、受惊吓后运动状况等）。 试验开始和结束时要测定pH、溶解氧和温度。试验期间，每天至少测定一次。 至少在试验开始和结束时，测定实验容器中试验液的受试物浓度。 试验结束时，对照组的死亡率不得超过10％。 五、实验