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* 第二节 修饰酶一.分类细菌DNA聚合酶 *E. Coli DNA聚合酶（全酶） *Klenow酶T4噬菌体DNA聚合酶 T4噬菌体DNA聚合酶 *测序酶（修饰的T7 pol） *Taq DNA聚合酶  *反转录酶 末端脱氧核苷酸转移酶 依赖于DNA的RNA聚合酶  SP6噬菌体RNA聚合酶 T3噬菌体RNA聚合酶 T4噬菌体RNA聚合酶  * 连接酶  E. Coli DNA连接 *T4 DNA连接酶 T4噬菌体 RNA连接酶 激酶 T4噬菌体多核苷酸激酶 磷酸酶 *碱性磷酸酶 核酸酶  Ba131核酸酶 S1核酸酶 绿豆核酸酶 RNaseA RNaseT1 DNaseI EXoⅢ  ?噬菌体外切核酸酶  * 二.聚合酶1. E. Coli DNA聚合酶  活性:（1）5??3?DNA聚合酶活性 （2）3??5?核酸外切酶活性 （3）5??3?核酸外切酶活性 主要用途：切口平移法标记DNA * 2. Klenow酶  枯草杆菌蛋白酶或胰蛋白酶降解 E. Coli DNA聚合酶得到的该酶的大片段 活性：（1）5??3?聚合酶活性 （2）3??5?外切核酸酶活性 主要用途： (1)补平3?凹端 (2)补平3?凹端，末端标记 (3)合成cDNA第二链 (4)体外诱变中从模板合成DNA第二链 * 3. T4 噬菌体DNA聚合酶 活性：（1）5??3?聚合酶活性 （2）3??5?外切核酸酶活性, 比 Klenow 酶强200倍 用途: 3’突出端切平 4. T7噬菌体DNA聚合酶  活性： 5??3?聚合酶活性很强,  无3??5?外切核酸酶活性 主要用途：修饰后用于测序5. Taq酶 耐热(75--80 ?C)的DNA聚合酶专用于PCR * 6.逆转录酶： AWV (源于鸟成髓细胞白血病病毒)， Mo-MLV(源于Moloney鼠白血病病毒) 活性： (1)5??3?聚合酶活性 (2) RNaseH活性(Mo-MLV 小,cDNA得率高) 主要用途： (1)反转录cDNA (2) 标记5?突出端（补平） (3) 测序 * 7.末端转移酶作用:在DNA或RNA3’羟基上加dNTP主要用途：(1)载体或cDNA加同聚尾(100nt) (2)DNA的3’OH同位素标记三. 激酶T4多聚核苷酸激酶催化ATP的 ?-磷酸基到DNA或RNA的5’ OH主要用途: DNA的5’OH同位素标记 (寡核苷酸) * * 四.连接酶 T4 DNA连接酶 连接：粘端，平端，dsDNA中的切口， 杂交体连接五.碱性磷酸酶 包括细菌碱性磷酸酶(BAP)和小肠碱性磷酸酶(CIP), 虾碱性磷酸酶(SAP)用途: 去除DNA、RNA、NTP、dNTP的5?磷酸根 * * 六.核酸酶1.DNA酶 为DNA内切核酸酶,水解单链或双链 用途:(1)缺口平移标记探针时产生随机切口 (2)降解DNA2.RNA酶 内切核糖核酸酶,专用降解RNA * 3. S1核酸酶 作用:降解单链DNA或RNA(酶量小) 降解双链DNA(酶量大) 用途:(1)去除DNA突出端,切为平头 (2)打开cDNA发夹结构4.外切核酸酶III(ExoIII)作用:从双链 DNA3’OH 逐一降解单核苷酸 不降解单链DNA或3’突出的从双链DNA用途:系列缺失亚克隆 * * 工具酶 * 第四章 工具酶 工具酶基因工程技术中能用于DNA和RNA