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专题五·DNA和蛋白质技术 课题1·DNA的粗提取与鉴定 【学习目标】通过尝试对动植物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的理化性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。 【学习重点、难点】DNA的粗提取和鉴定方法 【课堂展开】 一、提取生物大分子的基本思路： （一）基本思路： 选用一定的_______________方法分离具有_________________________的生物大分子。 （二）提取DNA的方法： 1、概念：利用DNA与___________、___________和___________等在物理和化学性质方面的___________，提取DNA，去除其他成分。 2、DNA的存在： 1）真核生物：DNA与________结合在一起形成__________，存在于________。 2）原核生物：DNA__________存在于_________，含量相对真核生物而言_________。 3、破碎细胞的方法： 动物细胞：_________________________________ 植物细胞：___________能够瓦解细胞膜、核膜等膜结构，但对_________没有影响。 4、原理： 分离：DNA和__________等其他成分在不同浓度的______溶液中溶解度不同，利用这一特点选择适当的___________就能使DNA充分溶解，而使___________沉淀，或者相反，以达到分离目的。 提纯： a.DNA不溶于___________，但是某些___________则可溶于其中。 b. ___________能水解蛋白质，但是对___________没有影响。 c.大多数蛋白质不能忍受___________的高温而发生变形，而DNA在___________以上才会变性。 利用以上原理可以将DNA与蛋白质进一步分离。 鉴定：① 在__________条件下，DNA遇__________会被染成______色。 ② DNA遇到___________会被染成_________色。 二、实验设计： （一）实验材料的选取：选用________含量相对较_______的生物组织，eg. ___________ 【思考1】生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，他们能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？_____________________________________________________________ （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液： 1、动物细胞的破碎——以“鸡血”为例【保存：加入____________，防止____________】 在鸡血细胞液中加入一定量的_______，同时用___________，_______后收集______即可。 2、植物细胞的破碎——以“洋葱”为例 先将洋葱切碎，然后加入一定的____________，进行充分地_________，过滤后收集______。 【思考2】见教材P55右侧1、2、3 （三）去除滤液中的杂质： 【方案一】通过控制__________________去除____________。 【方案二】直接向滤液中加入_________，反应10-15min，其中的________能够分解蛋白质。 【方案三】将滤液放在____________的恒温水浴箱中保温，注意严格控制温度范围，使_____ 沉淀析出，而____________分子还未变性，可以将DNA与蛋白质分离。 （四）DNA的进一步提取： 利用“DNA不溶于冷却的__________”这一原理，可从__________中析出较纯净的DNA，此时DNA的状态为__________。 （五）DNA的鉴定： 将_________溶于5mL物质的量浓度为__________溶液中，再加入4mL的_________试剂，__________加热5min，冷却后观察溶液的颜色。注意要同时设置__________实验。 三、操作提示： 1、以血液为实验材料时，每100mL血液中需要加入3g___________，防止____________。 2、加入洗涤剂后，动作要___________，否则容易产生大量的___________。 加入______和用___________时，动作要轻缓，以免加剧___________，导致DNA分子不能形成___________。 3、二苯胺试剂要___________。 四、实验步骤： 1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为0．1g/mL的 溶液，离心处理； 2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水（为什么？），搅拌、过滤； 3．溶解细胞核内的DNA：