厦门大学生物化学实验讲义教程.doc

生物化学实验 厦门大学环境与生态学院 2016.2  PAGE i 目 录  TOC \o 1-3 \u 实验室守则  PAGEREF _Toc177206187 \h 1 实验记录及实验报告  PAGEREF _Toc177206188 \h 2 实验一 淀粉的提取和水解  PAGEREF _Toc177206189 \h 4 实验二 总糖与还原糖的测定  PAGEREF _Toc177206190 \h 6 实验三 粗纤维的测定  PAGEREF _Toc177206191 \h 9 实验四 酪蛋白的制备  PAGEREF _Toc177206192 \h 12 实验五 粗脂肪的定量测定─索氏提取法  PAGEREF _Toc177206193 \h 14 实验六 蛋白质等电点测定  PAGEREF _Toc177206194 \h 16 实验七 氨基酸的分离鉴定－纸层析法  PAGEREF _Toc177206195 \h 18 实验八 蛋白质含量的测定  PAGEREF _Toc177206196 \h 21 实验九 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳  PAGEREF _Toc177206204 \h 34 实验十 影响酶活性的因素  PAGEREF _Toc177206205 \h 41 实验十一 碱性磷酸酶的分离提取及比活力的测定 45 实验十二 凝胶过滤层析纯化碱性磷酸酶 51 实验十三 DEAE-纤维素柱层析纯化碱性磷酸酶  PAGEREF _Toc177206208 \h 56 实验十四 底物浓度对酶活力的影响（米氏常数的测定）  PAGEREF _Toc177206209 \h 58 实验十五 聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离血清蛋白  PAGEREF _Toc177206210 \h 61 实验十六 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点 69 实验十七 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质亚基分子量  PAGEREF _Toc177206212 \h 74 实验十八 维生素C的定量测定 79 实验十九 猪脾DNA的制备  PAGEREF _Toc177206214 \h 84 实验二十 DNA的定量测定 87 实验二十一 DNA的琼脂糖凝胶电泳 89 实验二十二 RNA的定量测定 92 实验二十三 肌糖原的酵解作用 94 实验二十四 茶叶多糖的提纯与鉴定 97 仪器的使用 99 附录 101  PAGE 111 实 验 室 守 则 1、遵守课堂纪律，认真进行实验 每个学员应该自觉地遵守课堂纪律，维护课堂秩序，保持室内安静，不大声谈笑。实验过程中要听从教师指导，严格认真地按操作规程进行实验。并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上，完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室、实验后要认真写好实验报告，由课代表按期收交给教师，不无故拖延。 2、保持整洁 保持环境和仪器的整齐清洁是做好实验的重要条件，也是每个实验者必须养成的良好的工作习惯。实验台面和试剂药品架上都必须保持整洁，仪器药品放置要有次序，不要把试剂、药品洒在实验台面和地上，废液应倒进水槽内（强酸强碱必须都应倒入废品缸内，不可倒入水槽或随地乱扔。实验完毕需将仪器洗净收好，药品试剂排列整齐。注意保持实验台面干净及实验室整齐清洁。 3、药品使用 使用药品试剂必须注意节约杜绝浪费，要特别注意保持药品和试剂的纯净，药品用后须立即将瓶盖塞紧放回原处，从瓶中取出的试剂，标准溶液等，如未用尽切勿倒回瓶内，避免混杂。 4、仪器使用 各种仪器用具均应注意爱护，细心使用，防止损坏，使用电子天平，分光光度计和离心机等贵重精密仪器，要严格遵守操作规程，发现故障立即报告教师，不要自己动手检修，要爱护国家财产，厉行节约。 5、注意安全 为了有效地维护实验室安全，保证实验正常进行，要求： 1）要严格做到：火着人在，人走火灭； 2）勿使乙醚、丙酮、醇类等易燃液体接近火焰，蒸发或加热此类液体时，必须在水浴上进行，切勿用直火加热； 3）凡比水轻且不与水相混溶之物（如醚、苯、汽油等）着火时，应迅速用湿毛巾覆盖火焰，以隔绝空气使其熄灭，绝不能倒水于其上，以免火焰蔓延，对于易与水混溶之物（如乙醇、丙酮等）着火时，可用火扑灭之； 4）有不少药品是有毒或有腐蚀性的不可用手直接拿药品，不可将试剂瓶直接对准鼻子闻，更不可尝药品味道。用移液管吸取有毒试剂，强酸和强碱时，均应用洗耳球，严禁用口吸取； 5）离开实验室时，要关好水龙头，拉下电闸，认真